Le traumatisme social engage les circuits du septum latéral pour obstruer la récompense sociale

May 26, 2023

Nature volume 613, pages 696–703 (2023)Citer cet article

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Chez les humains, les expériences sociales traumatisantes peuvent contribuer aux troubles psychiatriques1. Il est suggéré que le traumatisme social altère la fonction de récompense du cerveau, de sorte que le comportement social n'est plus gratifiant, conduisant à un évitement social sévère2,3. Chez les rongeurs, le modèle de stress de défaite sociale chronique (CSDS) a été utilisé pour comprendre la neurobiologie sous-jacente à la susceptibilité au stress par rapport à la résilience suite à un traumatisme social, mais on sait peu de choses sur son impact sur la récompense sociale4,5. Ici, nous montrons que, suite au CSDS, un sous-ensemble de souris mâles et femelles, appelées sensibles (SUS), évitent les interactions sociales avec des souris juvéniles C57BL/6J non agressives et de même sexe et ne développent pas de récompense sociale dépendante du contexte suite à des rencontres avec eux. Les facteurs de stress non sociaux n'ont aucun effet sur la récompense sociale chez les deux sexes. Ensuite, en utilisant la cartographie Fos du cerveau entier, l'imagerie Ca2+ in vivo et les enregistrements de cellules entières, nous avons identifié une population de neurones de la neurotensine du septum latéral (NTLS) sensibles au stress/à la menace qui sont activés par les interactions sociales juvéniles uniquement chez les souris SUS, mais pas chez des souris témoins résilientes ou non stressées. La manipulation optogénétique ou chimiogénétique des neurones NTLS et de leurs connexions en aval module l'interaction sociale et la récompense sociale. Ensemble, ces données suggèrent que des cibles sociales auparavant gratifiantes sont peut-être perçues comme des menaces sociales chez les souris SUS, résultant de neurones NTLS hyperactifs qui bloquent le traitement des récompenses sociales.

L'évitement social se manifeste dans une multitude de maladies psychiatriques, avec des causes allant du désintérêt pour les contacts sociaux6 aux états émotionnels négatifs évoqués par les rencontres sociales7. Bien que les causes de l'évitement social soient diverses8, les traumatismes sociaux passés peuvent entraîner un évitement social grave censé refléter une récompense sociale réduite2,9. Malgré une compréhension clinique approfondie du traumatisme social et de ses effets sur le comportement social, nous en savons très peu sur les circuits neuronaux sous-jacents impliqués. Des modèles précliniques de traumatisme social, tels que le stress de défaite sociale chronique (CSDS), ont été utilisés pour mieux comprendre les mécanismes des circuits neuronaux qui contrôlent le comportement émotionnel4,5,10. Le CSDS réduit les comportements exploratoires et la préférence pour les récompenses naturelles comme le saccharose, et entraîne un évitement social sévère interprété comme une anhédonie sociale5,10. Cependant, des études CSDS antérieures ont évalué l'interaction sociale avec une souris CD-1 adulte, similaire à celles utilisées comme agresseurs pour induire le traumatisme social. L'évitement social dans ces circonstances reflète probablement la peur ou un comportement de soumission plutôt qu'une récompense sociale altérée.

Pour mieux comprendre si les déficits de récompense sociale sont induits par le CSDS, nous avons évalué le comportement social en testant l'interaction sociale et la préférence de lieu conditionnée sociale (sCPP) avec une souris juvénile C57BL/6J non menaçante de même sexe qui, dans des conditions de contrôle, est gratifiante . Le CSDS - mais pas les facteurs de stress chroniques non sociaux comme le stress variable chronique (CVS) - bloque la récompense sociale dans un sous-ensemble de souris appelées sensibles (SUS). Nous avons ensuite utilisé une approche basée sur les circuits pour mieux comprendre les mécanismes par lesquels une expérience sociale traumatisante antérieure avec un agresseur masculin adulte affecte le traitement ultérieur de la récompense sociale. Après le CSDS, les souris SUS présentent une activité accrue dans les circuits neuronaux de la neurotensine du septum latéral (NTLS), qui bloquent la récompense sociale et favorisent un comportement d'évitement social soutenu même lorsqu'ils sont présentés dans une situation sociale non menaçante.

Pour étudier comment le CSDS affecte l'interaction sociale et la récompense sociale, des souris mâles et femelles de type sauvage (WT) âgées de 7 à 8 semaines ont subi un CSDS standard suivi d'un test d'interaction sociale avec une souris CD-1 ou ERα-Cre F1. Comme décrit précédemment, les souris ont été classées comme résilientes (RES) ou SUS en fonction de leur comportement d'interaction sociale (c'est-à-dire le rapport d'interaction sociale (SI)) (Fig. 1a, b, g et Extended Data Fig. 1a, b, d ,e). Cela a été suivi d'un test d'intrus résident (RI) et d'un sCPP avec des souris C57BL / 6J juvéniles de même sexe âgées de 4 à 6 semaines. Au cours du test RI, les souris témoins (CTRL) et RES ont présenté des comportements sociaux similaires envers le juvénile, y compris la quantité d'interaction active (c'est-à-dire l'approche, le suivi rapproché et le reniflement). Les souris de ces groupes se retiraient rarement lorsque le juvénile s'approchait et enquêtait, ce que nous définissons comme une enquête sociale passive. Inversement, les souris SUS ont présenté une enquête sociale beaucoup moins active, une latence plus longue jusqu'au premier combat social et un évitement social significativement plus important lors d'une enquête sociale passive avec un mineur (Fig. 1c, d, h, i et Données étendues Fig. 1c, f). Le temps d'investigation sociale, l'évitement social et la latence pour enquêter sont corrélés au rapport SI lors du test avec un CD-1 (Extended Data Fig. 1g – l). Ces résultats montrent que les souris SUS évitent non seulement les souris mâles CD-1 adultes agressives, mais également les souris juvéniles C57BL/6J du même sexe non menaçantes. Nous avons ensuite utilisé le test sCPP pour évaluer la préférence sociale ; CTRL et RES, mais pas SUS, les souris ont formé une préférence sociale pour le contexte apparié d'intrus (Fig. 1e, j), ce qui suggère que l'interaction juvénile n'est pas gratifiante pour les souris SUS. Le score sCPP était corrélé au ratio SI (Fig. 1f, k) ainsi qu'au temps d'investigation sociale, au nombre d'évitements sociaux et à la latence jusqu'au premier combat social pendant le test RI (Extended Data Fig. 1m – r). Le cycle œstral féminin n'était associé à aucune différence dans la formation de sCPP (Extended Data Fig. 1s). Fait intéressant, nous avons constaté que les souris femelles formaient un sCPP significatif uniquement lorsque les souris juvéniles étaient confinées dans une tasse en treillis métallique pendant le conditionnement (Extended Data Fig. 1t), nous avons donc utilisé cette conception pour toutes les études chez les femelles. Tous les paramètres comportementaux étaient normalement distribués, à l'exception de l'évitement social (Extended Data Fig. 1u). Étant donné que le sCPP dépend de processus d'apprentissage et de mémoire intacts, nous avons effectué des tests de reconnaissance de nouveaux objets et de nouveaux emplacements et n'avons trouvé aucune preuve de déficits d'apprentissage et de mémoire chez les souris SUS ou RES par rapport aux souris CTRL (Extended Data Fig. 2a – c) . Pour tester si l'ordre dans lequel les tests comportementaux ont été effectués affectait les aspects du comportement social, nous avons inversé l'ordre des tests (sCPP – RI – SI) chez les souris WT après CSDS et avons trouvé des effets similaires (Extended Data Fig. 2d, e). Ensuite, nous avons d'abord regroupé les souris par scores sCPP (préférence sociale) et avons trouvé une corrélation positive similaire avec l'enquête sociale dans le test RI ainsi qu'une tendance pour le ratio SI (Extended Data Fig. 2f, g), ce qui suggère à nouveau que ces différents réseaux sociaux les comportements sont largement corrélés les uns aux autres. Ensemble, ces données soutiennent l'idée que l'évitement social induit par le CSDS résulte de perturbations dans le traitement des récompenses sociales, ce qui nous a amenés à considérer que les souris SUS peuvent en fait percevoir les cibles sociales juvéniles comme menaçantes ou stressantes.

a, Chronologie expérimentale des tests de comportement social suite à une défaite sociale chronique. b,g, ratios SI des femmes (analyse de variance unidirectionnelle (ANOVA) avec le test de comparaisons multiples de Tukey, F (2, 31) = 53,96, P < 0,0001, n = 10 (CTRL), 12 (RES), 12 (SUS) (b) et des hommes (ANOVA unidirectionnelle, F (2, 46) = 24,36, P < 0,0001, n = 10 (CTRL), 13 (RES), 26 (SUS) (g). c, h, temps d'investigation sociale à partir du test RI des femmes (ANOVA à un facteur, F (2, 31) = 6,755, P = 0,0037) (c) et des hommes (F (2, 46) = 14,82, P < 0,0001) (h).d,i, Évitement social des femmes (F (2, 31) = 33,13, P < 0,0001) (d) et des hommes (F (2, 46) = 15,37, P < 0,0001) (i) e, Temps passé dans des chambres appariées et non appariées pendant le test sCPP (CTRL féminin (ANOVA à mesures répétées à deux voies suivie du test de comparaisons multiples de Šídák, F (1, 18) = 7,023, P = 0,0163, n = 10); Souris RES (F (1, 22) = 4,598, P = 0,0433, n = 12) et souris SUS (F (1, 22) = 0,08155, P = 0,7779, n = 12)). f, Corrélation entre le rapport SI et sCPP chez les femmes (R2 = 0,1474, P = 0,025). j, Temps passé dans des chambres appariées et non appariées pendant le test sCPP (ANOVA à mesures répétées à deux facteurs : CTRL masculin (F (1, 18) = 6,074, P = 0,0240 , n = 10); Souris RES (F (1, 26) = 7,499, P = 0,0110, n = 13) ; et souris SUS (F (1, 50) = 0,4818, P = 0,4908, n = 26)). k, Corrélation entre le ratio SI et le sCPP chez les hommes (R2 = 0,08939, P = 0,0369). NS, non significatif. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. Toutes les données exprimées en moyenne ± sem

Données source

Pour étudier les mécanismes de circuit médiant les déficits de récompense sociale chez les souris SUS, nous avons effectué une procédure de cartographie Fos du cerveau entier en utilisant la méthode iDISCO + pour examiner les régions cérébrales modulées de manière différentielle après le CSDS lorsque les souris étaient exposées à des intrus juvéniles (Fig. 2a et Données étendues Fig. 3a–h). Les cerveaux dégagés (Fig. 2b) ont été imagés sur un microscope à feuille de lumière (Fig. 2c), suivis d'un enregistrement et d'une annotation (Extended Data Fig. 3i) à l'aide de ClearMap12. Pour dépister d'abord les régions cérébrales potentiellement pertinentes, les cellules Fos + ont été comparées entre les souris CTRL, SUS et RES afin d'identifier les régions cérébrales régulées de manière différentielle chez les deux sexes (Fig. 2d, tableaux de données étendus 1 à 5 et tableau supplémentaire 1). Fait intéressant, nous avons trouvé des différences dramatiques basées sur le sexe dans l'activité Fos lors de la comparaison des souris RES et SUS, bien que les deux sexes présentent des déficits sociaux similaires. Par rapport aux mâles RES, les mâles SUS ont montré une augmentation significative des cellules Fos+ dans 47 régions alors que les femelles SUS ont montré des augmentations significatives dans seulement 22 régions. Notamment, le septum latéral (LS) était l'une des régions cérébrales les plus activées chez les mâles et les femelles SUS par rapport aux souris RES, nous l'avons donc sélectionné pour une enquête plus approfondie. Pour confirmer que l'activation de Fos chez les souris SUS était due à la présence d'une cible sociale, nous avons effectué un test RI supplémentaire après CSDS avec un nouvel objet par rapport à un intrus juvénile. Dans ces conditions, nous avons constaté que l'activité Fos était significativement plus élevée chez les souris SUS après une interaction juvénile par rapport à une interaction nouvel objet. Bien que nous ayons observé une légère augmentation de l'activité Fos suite à l'interaction nouvel-objet et juvénile chez les souris RES, il n'y avait aucune différence significative dans le temps passé entre elles (Extended Data Fig. 3j, k).

a, Chronologie de l'analyse iDISCO+ Fos du test RI après CSDS. Sac chronométré, les souris ont été perfusées 90 min après le test RI. b, cerveau de souris avant et après compensation iDISCO+. c, signal d'autofluorescence et de Fos provenant de l'imagerie par feuille de lumière. d, analyse ClearMap montrant les régions cérébrales activées de manière différentielle des souris RES par rapport aux souris SUS. Les pointes de flèches indiquent LS. e, Expression de la neurotensine à partir des données Allen Brain Atlas ISH. f, Chronologie de l'ISH. g,h, Multiplex ISH (g) montrant l'expression de Fos (h) dans les neurones NT chez les femelles (ANOVA unidirectionnelle, F (2, 6) = 7,887, P = 0,0209, n = 3 souris par groupe, trois tranches par souris ) et mâles (F (2, 10) = 13,13, P = 0,0016, n = 3 (CTRL), 4 (RES), 6 (SUS), trois tranches par souris) ; barres d'échelle, 50 μm. LV, ventricule latéral. i, Chronologie de l'électrophysiologie des tranches (ePhys) suivant le CSDS. j, neurones eYFP + NTLS patchés en configuration cellule entière. k, courbe courant-fréquence montrant le nombre de potentiels d'action évoqués par des pas incrémentiels de courant injecté. Neurones NTLS de souris SUS (n = 55 neurones) par rapport aux souris RES (ANOVA bidirectionnelle, P < 0,0001, n = 19). l, Potentiel de membrane au repos (RMP) pour les souris SUS et RES (test bilatéral de Mann-Whitney, P = 0,0336, n = 4 (RES), 9 (SUS). m, Corrélation entre le rapport SI et le taux de déclenchement évoqué par un Courant de pas de 100 pA (corrélation de Pearson, R2 = 0,34, P = 0,0351). Chaque point représente la valeur moyenne par souris pour les souris RES (rouge, n = 4) et SUS (noir, n = 9). n, Échantillon de traces de excitabilité pour les souris RES (rouge) et SUS (noir) après injection de courant de 100 pA. * P < 0,05, ** P < 0,01. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem

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En raison de ses interconnexions réciproques denses à travers les principaux centres de récompense du cerveau, le LS est souvent considéré comme un lien pour l'humeur13,14,15,16, la motivation17,18 et le traitement de l'information spatiale19. Fait intéressant, chez les souris SUS après RI juvénile, nous avons constaté que la plupart des neurones exprimant Fos étaient situés spécifiquement dans la partie latéral-ventrale du LS. En utilisant la base de données d'hybridation in situ (ISH) d'Allen Brain Atlas, nous avons trouvé plusieurs gènes exprimés spécifiquement dans la partie latéro-ventrale du LS, notamment la neurotensine (Nt) (Fig. 2e) et le récepteur 2 de l'hormone de libération de la corticotrophine (Crhr2). Le récepteur de l'ocytocine (Oxtr) était exprimé spécifiquement dans la partie latérale, la somatostatine (Sst) était exprimée principalement dans la partie dorsale-latérale et le récepteur de la dopamine D3 (Drd3) était exprimé uniquement dans la partie médiale du LS. Plusieurs études récentes ont examiné le rôle de ces types de cellules moléculairement définies dans la régulation du comportement, y compris les neurones Sst+ dans le conditionnement de la peur21, les neurones vGAT+ et Nt+ dans l'alimentation avec suppression du stress22,23, les neurones Crhr2+ dans le comportement de type anxieux24, ainsi que les neurones Oxtr+ et Neurones Drd3+ dans la peur sociale25 et le dysfonctionnement social26. Pour déterminer quel type de cellule était activé par l'interaction sociale juvénile chez les souris SUS, nous avons effectué une ISH multiplex sur des tranches de cerveau de souris CSDS après une RI juvénile (Fig. 2f). Nous avons trouvé plus de 94% de colocalisation entre Nt et Fos chez les souris SUS, avec une expression très limitée de Fos dans les cellules Nt– (Fig. 2g, h et Extended Data Fig. 4a). Environ 100% de toutes les cellules Nt + étaient GABAergiques (Extended Data Fig. 4b, c). Fait intéressant, les ARN messagers Nt et Crhr2 étaient largement colocalisés dans la partie antérieure mais pas dans la partie postérieure du LS, où nous avons constaté des augmentations significatives des niveaux de Fos après une RI juvénile chez des souris SUS (Extended Data Fig. 4d, e). Les neurones Nt + avaient un chevauchement d'environ 5% avec Drd3 + et d'environ 20% avec les neurones Oxtr + (Extended Data Fig. 4f – i). Fait intéressant, nous avons également constaté une augmentation des neurones Sst + Fos + chez les souris SUS après une interaction sociale juvénile par rapport aux souris CTRL, mais pas entre les souris RES et SUS (Extended Data Fig. 4j, k). Enfin, nous n'avons trouvé aucune différence dans les neurones Nt – Fos + entre les souris CTRL, RES et SUS (Extended Data Fig. 4l). Ensemble, ces données mettent en évidence une implication potentiellement forte des neurones NTLS dans les déficits de récompense sociale chez les souris SUS.

Pour confirmer que les neurones NTLS étaient effectivement hyperactivés chez les souris SUS suite à une interaction avec un juvénile, nous avons utilisé une approche électrophysiologique de tranche de cellule entière pour enregistrer les neurones NTLS chez des souris mâles vaincues à la suite d'un test RI juvénile (Fig. 2i, j). Nous avons constaté que les neurones NTLS de souris SUS présentaient une excitabilité accrue (Fig. 2k, n), ainsi qu'une diminution du potentiel de membrane au repos (Fig. 2l et Extended Data Fig. 5a), par rapport aux souris RES. Fait intéressant, nous avons également constaté que l'excitabilité de ces cellules était négativement corrélée au rapport SI observé après CSDS (Fig. 2m). Ces changements dans les propriétés intrinsèques des neurones NTLS suggèrent que le CSDS induit des adaptations durables dans ces cellules, qui interviennent dans le dysfonctionnement social. Fait intéressant, nous n'avons trouvé aucune différence dans les autres propriétés de ces cellules (seuil de potentiel d'action, amplitude, demi-largeur ou hyperpolarisation rapide; données étendues Fig. 5a), confirmant que le CSDS augmente spécifiquement l'excitabilité de ces cellules chez les souris SUS.

Pour étudier plus avant l'activité des neurones NTLS in vivo lors de rencontres sociales avec des juvéniles, nous avons injecté des virus adéno-associés Cre-dépendants (AAV) -DIO-GCaMP6 dans le LS de souris transgéniques Nt-Cre pour marquer les neurones NTLS (Fig. 3a). Nous avons ensuite mesuré l'activité fluorescente du Ca2+ par photométrie des fibres (FP) chez les souris CTRL, RES et SUS au cours de l'IR juvénile (Fig. 3b et Extended Data Fig. 5b). Nous n'avons trouvé aucune augmentation de l'activité des neurones NTLS chez les souris CTRL (Fig. 3c, d) et RES (Fig. 3e, f) en réponse à l'approche juvénile, mais les souris SUS présentaient une activité significativement plus élevée (Fig. 3g, h). Étonnamment, l'ampleur (changement d'environ 5 à 10 % de la fluorescence (ΔF/F)) de l'augmentation de l'activité des neurones NTLS au cours de l'approche juvénile était similaire à celle observée lorsque des souris CTRL non stressées rencontraient une expérience aversive, comme être attaquée par un agressif. Souris CD-1 (Fig. 3i, j) ou éprouvant un pincement douloureux de la queue administré par l'investigateur (Fig. 3k, l). De plus, l'activité des neurones NTLS n'a montré aucun changement après la consommation d'aliments agréables au goût (Extended Data Fig. 5c). Ces résultats sont cohérents avec l'idée que les neurones NTLS répondent aux stimuli aversifs, mais pas aux stimuli gratifiants. Nous avons en outre testé l'activité des neurones NTLS pendant le conditionnement sCPP et avons constaté que les neurones NTLS chez les souris SUS présentaient une activité plus élevée pendant la session de conditionnement jumelé juvénile, sans aucun changement observé chez les souris CTRL ou RES (Extended Data Fig. 5d). Sur la base de ces données, nous suggérons que, suite au CSDS, les souris SUS peuvent sur-généraliser les signaux de menace sociale et percevoir les juvéniles comme des menaces sociales, similaires à celles observées lorsqu'elles sont attaquées par une souris CD-1 très agressive.

a, injection et expression d'AAV-DIO-GCaMP6s dans LS. b, Chronologie des expériences de PF. c–h, à gauche, trace représentative de Ca2+ des neurones NTLS lors du test d'intrus résident (les bandes roses indiquent une enquête sociale passive) ; graphique intermédiaire et péri-événementiel de l'activité des neurones NTLS 2 s avant et après l'approche de l'intrus ; à droite, statistiques de l'activité neuronale 2 s avant et 2 s après les événements sociaux chez les femmes CTRL (test t bilatéral apparié, t6 = 3,379, P = 0,0149, n = 7) (c) et les hommes (t6 = 0,5081, P = 0,6295, n = 7) (d) ; chez les femmes RES (t4 = 0,6528, P = 0,5495, n = 5) (e) et les hommes (t4 = 0,2939, P = 0,7834, n = 5) (f) ; et chez les femmes SUS (t4 = 3,772, P = 0,0196, n = 5) (g) et les hommes (t4 = 4,844, P = 0,0084, n = 5) (h). i–l, à gauche, trace Ca2+ représentative des neurones NTLS chez les souris CTRL pendant la défaite sociale et les pincements de la queue ; parcelle médiane et péri-événement de l'activité des neurones NTLS 2 s avant et 2 s après l'attaque/pincement de la queue ; à droite, statistiques de l'activité neuronale 2 s avant et 2 s après événement dans la défaite féminine (t7 = 6,852, P = 0,0002, n = 8) (i), défaite masculine (t6 = 6,973, P = 0,0010, n = 7) ( j), pincement de queue femelle (t4 = 3,988, P = 0,0163, n = 5) (k) et pincement de queue mâle (t5 = 6,137, P = 0,0017, n = 6) (l). Toutes les données ont été analysées à l'aide d'un test t bilatéral apparié. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem Barre d'échelle, 100 μm. Les illustrations en b ont été créées avec BioRender (https://biorender.com).

Données source

Pour évaluer si les neurones NTLS régulent les comportements sociaux après le CSDS, nous avons utilisé des vecteurs viraux exprimant des récepteurs de concepteur exclusivement activés par des médicaments de concepteur (DREADD) pour manipuler de manière bidirectionnelle l'activité des neurones NTLS pendant l'IS avec une souris CD-1, ainsi que pendant l'IR juvénile et le sCPP. . Environ 3 à 4 semaines avant le CSDS, nous avons injecté les virus AAV-DIO-hM3Dq, AAV-DIO-hM4Di ou AAV-DIO-mCherry dans le LS de souris Nt-Cre âgées de 4 semaines (Fig. 4a et Extended Data Fig. 6a). Les souris ont été assignées au hasard aux conditions CTRL ou CSDS. Pour les études d'inhibition avec hM4Di afin de montrer la nécessité, nous n'avons utilisé que des souris SUS, tandis que pour les études d'activation visant à montrer la suffisance, nous n'avons utilisé que des souris RES (remarque : SI de base différent pour les souris SUS hM4Di et RES hM3Dq traitées avec le véhicule sur la figure 4). Les tests ont été effectués en utilisant une conception intra-sujets dans laquelle les souris ont d'abord été testées pour le SI 30 min après l'injection du véhicule ; puis, 30 min avant le deuxième SI, les souris ont reçu une injection intrapéritonéale de N-oxyde de clozapine (CNO). Nous avons trouvé des effets bidirectionnels de la modulation des neurones NTLS sur le SI chez les femelles et les mâles, avec une activité accrue réduisant le SI chez les souris RES et une diminution de l'activité augmentant le SI chez les souris SUS (Fig. 4b, i). Les souris ont ensuite été divisées en deux groupes pour RI, en veillant à ce que le rapport SI soit équilibré entre les groupes ; les souris ont reçu soit le véhicule, soit le CNO pendant le test RI. L'inhibition des neurones NTLS a augmenté le temps d'investigation sociale et normalisé le comportement d'évitement chez les deux sexes (Fig. 4c, d, j, k). Pour le sCPP, nous avons traité des souris SUS injectées par hM4Di et des souris RES injectées par hM3Dq avec un véhicule ou un CNO lors de séances de conditionnement social. Nous avons constaté qu'en inhibant les neurones NTLS chez les souris SUS, nous pouvions normaliser la préférence pour le compartiment social conditionné aux niveaux CTRL ou RES chez les deux sexes (Fig. 4e, f, l, m). Inversement, en activant les neurones NTLS chez les souris RES, nous avons pu réduire l'investigation sociale et la préférence sociale par rapport à leurs témoins traités avec le véhicule chez les deux sexes (Fig. 4g, h, n, o). Ainsi, nous constatons que l'activation des neurones NTLS résultant d'un traumatisme social est à la fois nécessaire et suffisante pour provoquer des déficits de comportement social. Fait intéressant, l'activation des neurones NTLS chez des souris naïves au stress n'a affecté ni le rapport SI ni le sCPP (Extended Data Fig. 6b – d), ce qui suggère qu'une histoire de traumatisme social est essentielle. Dans cette optique, nous ne trouvons aucun effet des facteurs de stress non sociaux, tels que le CVS, sur la récompense sociale (données étendues Fig. 6e, f), malgré le fait que le CSDS et le CVS réduisent de la même manière les préférences pour les récompenses naturelles comme le saccharose27. Conformément à cela, une étude récente a montré que les neurones CA3 ventraux se projetant vers le LS jouent un rôle dans l'évitement aigu induit par le stress social28, mais pas chez les souris non stressées29. Pour tester si les neurones NTLS peuvent réguler plus généralement le comportement de récompense ou d'aversion, nous avons utilisé un test de préférence de lieu en temps réel (RTPP) chez des souris naïves au stress et n'avons trouvé aucun effet de la stimulation optogénétique des neurones NTLS sur la préférence (Extended Data Fig. 6g, h). Prises ensemble, ces données soutiennent l'idée que les circuits NTLS modulent les comportements sociaux en fonction du contexte.

a, Chronologie expérimentale pour les expériences DREADD. b–d,i–k, rapport SI, enquête sociale et évitement social après activation chimiogénétique (souris RES) ou inhibition (souris SUS) des neurones NTLS lors d'un test social après CSDS (ANOVA à mesures répétées bidirectionnelles, femelle : F ( 2, 53) = 9,785, P = 0,0002, n = 18 (hM3Dq), 20 (hM4Di), 16 (mCherry) (b), F (2, 25) = 5,807, P = 0,0085 (c), F (2 , 25) = 5,906, P = 0,0079, n = 9 (hM3Dq), 10 (hM4Di), 8 (mCherry) (d) ; mâle : F (2, 64) = 12,96, P < 0,0001, n = 30 (hM3Dq ), 20 (hM4Di), 17 (mCherry) (i), F (2, 20) = 19,46, P < 0,0001 (j), F (2, 20) = 10,12, P = 0,0009, n = 8 (hM3Dq) , 8 (hM4Di), 7 (mCherry) (k)). e–h,l–o, Préférence sociale sauvée par l'inhibition des neurones NTLS chez les souris SUS femelles (ANOVA à mesures répétées bidirectionnelles, CNO (e), F (1, 14) = 7,272, P = 0,0174, n = 8 véhicule (f), F (1, 14) = 0,3070, P = 0,5883, n = 8); et chez les souris SUS mâles (CNO (l), F (1, 14) = 4,710, P = 0,0477, n = 8 ; véhicule (m), F (1, 18) = 1,627, P = 0,2183, n = 10) . Activation des populations NTLS chez les femmes RES (ANOVA à mesures répétées bidirectionnelles, CNO (g), F (1, 18) = 0,1653, P = 0,6891, n = 10 ; véhicule (h), F (1, 18) = 8,490, P = 0,0093, n = 10); et chez les hommes RES (CNO (n), F (1, 14) = 0,2221, P = 0,6447, n = 8 ; véhicule (o), F (1, 16) = 9,283, P = 0,0077, n = 9) bloqué constitution du RPC social. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001. Toutes les données exprimées en moyenne ± sem

Données source

Pour déterminer si les neurones NTLS codent des informations spécifiques au contexte liées aux facteurs de stress non sociaux, nous avons exposé des souris WT à un stress de contrainte chronique (CRS), puis effectué un test d'interaction avec un nouveau tube de contrainte. Nous avons constaté que les souris exposées au CRS avaient une latence plus longue pour s'approcher du tube et un temps réduit passé à étudier le tube (données étendues Fig. 7a, b). Nous avons ensuite réduit au silence les neurones NTLS avec un DREADD inhibiteur et avons constaté que cet évitement de tube partiellement sauvé (Extended Data Fig. 7c, d). Dans un groupe séparé, nous avons apparié des souris WT avec une literie/odeur juvénile pendant le CRS (CRSO) et n'avons trouvé aucune différence dans le test RI juvénile, ce qui suggère que les souris ne généralisent pas l'évitement à une cible sociale juvénile en fonction de l'exposition à ces signaux olfactifs (Extended Données Fig. 7e, f). Dans l'ensemble, ces données suggèrent que les neurones NTLS sont impliqués dans des calculs plus généraux qui utilisent des informations passées provenant de situations stressantes ou menaçantes pour guider les comportements futurs vers des signaux associés à des situations identiques ou similaires menaçantes/stressantes. Enfin, nous avons trouvé un rôle pour les neurones NTLS dans la médiation des comportements liés à l'anxiété, tels que le labyrinthe surélevé (EPM), le test d'enfouissement de marbre et le test en champ ouvert (OFT) (Extended Data Fig. 7g – j). Ensemble, ces résultats mettent en évidence le LS comme un nœud critique dans la régulation des comportements émotionnels, en particulier en réponse à des expériences aversives/stressantes.

Le LS contient des neurones de projection GABAergiques à longue portée30 et a des projections d'entrée-sortie à large plage distribuées topographiquement18,31,32. Pour déterminer les modèles de sortie des neurones NTLS, nous avons appliqué plusieurs outils de traçage antérograde à médiation virale. Tout d'abord, nous avons injecté une protéine fluorescente jaune (eYFP) améliorée par AAV-DIO dans le LS de souris Nt-Cre et imagé les terminaisons axonales eYFP + dans tout le cerveau (Fig. 5a). Nous avons ensuite utilisé HSV-1 (H129ΔTK-TT) pour le traçage trans-synaptique antérograde afin de vérifier quelles régions forment des connexions monosynaptiques avec les neurones NTLS (Fig. 5b et Extended Data Fig. 8a). Fait intéressant, de nombreuses régions en aval identifiées, telles que la zone préoptique médio-latérale (LPO / MPO), le noyau accumbens (NAc), le noyau hypothalamique antérieur (AHN), l'hypothalamus latéral (LH), le gris périaqueducal (PAG), l'amygdale médiale (MEA) et le noyau supramammillaire (SuM), sont tous impliqués dans divers aspects du comportement social34 ou de la récompense conditionnée35. Parmi ces régions, la NAc est impliquée dans la récompense sociale36,37 et la susceptibilité au stress35,38, et la PAG dans l'agression sociale39, ainsi que dans les comportements défensifs et de fuite40,41. Bien que l'AHN joue un rôle dans le comportement défensif42 et le comportement parental43, son rôle dans la récompense sociale reste méconnu. Nous voulions d'abord déterminer si des neurones NTLS identiques ou différents se projettent sur chacun de ces sites. Nous avons injecté un AAV rétrograde dépendant de Cre (rgAAV-DIO) exprimant tdTomato dans l'AHN, le NAc ou le PAG de souris Nt-Cre (Extended Data Fig. 8b). Chez les mêmes souris, rgAAV-DIO-eYFP a été injecté dans les régions alternatives et nous avons visualisé le chevauchement entre tdTomato et eYFP dans les neurones NTLS. Nous avons également injecté la sous-unité B de la toxine cholérique (CTB) dans le NAc (CTB488), l'AHN (CTB555) et le PAG (CTB647) (Extended Data Fig. 8d) et avons trouvé des résultats similaires : AHN/NAc-, AHN/PAG- et NAc/ Les neurones LS projetant PAG ont montré peu de chevauchement (données étendues Fig. 8c, e), confirmant en outre que les neurones LS projetant vers ces régions représentent principalement des sous-populations distinctes. Pour étudier la fonction de ces circuits NTLS, nous avons injecté AAV-DIO-ChR2(H134R) dans le LS de souris Nt-Cre âgées de 5 semaines et implanté des férules dans le NAc, l'AHN ou le PAG. Trois semaines plus tard, les souris ont subi un CSDS sous-seuil (stCSDS) et le comportement social a été testé au cours d'un test RI juvénile de 2 jours et 5 minutes dans lequel l'ordre d'activation / désactivation du laser était contrebalancé (Fig. 5c). L'activation des circuits NTLS → AHN ou NTLS → NAc a diminué le temps d'investigation sociale active sans affecter le comportement d'évitement social lors des épisodes sociaux passifs initiés par le juvénile (Fig. 5d – i). Cependant, l'activation du circuit NTLS → PAG n'a eu aucun effet sur le temps d'investigation sociale ou sur l'évitement social (Fig. 5j – l). Pour valider davantage si la manipulation des circuits NTLS → AHN ou NTLS → NAc peut moduler de manière bidirectionnelle l'interaction sociale, nous avons injecté AAV-DIO-eNpHR3.0 dans le LS, puis effectué CSDS (Extended Data Fig. 9a). Nous avons constaté que l'inhibition des circuits NTLS → AHN ou NTLS → NAc augmentait l'investigation sociale et diminuait partiellement l'évitement social pendant le test RI (Extended Data Fig. 9b – e). Pour tester si ces voies contrôlent de manière bidirectionnelle les préférences sociales, nous avons injecté AAV-DIO-ChR2 ou AAV-DIO-eNpHR3.0, exposé des souris à un stress de défaite sociale, puis effectué une stimulation optique des circuits NTLS → AHN ou NTLS → NAc pendant le social. séance de conditionnement. Comme prévu, nous avons constaté que la régulation bidirectionnelle des deux voies affectait le sCPP (Extended Data Fig. 9f – m). La manipulation eNpHR3.0 semblait avoir des effets plus subtils en général, peut-être en raison de sa faible efficacité dans l'inhibition présynaptique. Des outils optogénétiques couplés aux protéines G récemment développés pourraient fournir une méthode plus convaincante pour l'inhibition présynaptique à longue portée dans les études futures.

a, tracé antérograde AAV-DIO-eYFP à partir de neurones NTLS. b, le traçage trans-synaptique antérograde HSV-1 (H129ΔTK-TT) (70 h après l'injection) vérifie les connexions monosynaptiques entre les neurones NTLS et les régions indiquées en a. c, injection d'AAV-DIO-ChR2 et chronologie des expériences d'optogénétique des intrus résidents. d–l, activation terminale de l'axone ChR2 dans NAc (d), AHN (g) et PAG (j) pendant le test RI chez les femmes (NAc (e), enquête sociale, F (1, 12) = 4,836, P = 0,0482 ; évitement social, F (1, 12) = 2,935, P = 0,1123, n = 8 (ChR2), 6 (eYFP); AHN (h), enquête sociale, F (1, 12) = 4,947, P = 0,0461, social évitement, F (1, 12) = 0,8571, P = 0,3728, n = 8 (ChR2), 7 (eYFP)); PAG (k), enquête sociale, F (1, 13) = 0,6986, P = 0,4183 ; évitement social, F (1, 13) = 0,07324, P = 0,7909, n = 8 (ChR2), 6 (eYFP) ; et chez les hommes (enquête sociale, NAc (f), F (1, 13) = 4,540, P = 0,0528 ; évitement social, F (1, 13) = 0,2848, P = 0,6026, n = 9 (ChR2), 5 ( eYFP ); AHN (i), enquête sociale, F (1, 13) = 28,94, P = 0,0001, évitement social, F (1, 13) = 0,06521, P = 0,8024, n = 8 (ChR2), 7 (eYFP ); PAG (l), enquête sociale, F (1, 14) = 0,002038, P = 0,9646 ; évitement social, F (1, 14) = 1,750, P = 0,2071, n = 9 (ChR2), 6 (eYFP) (F)). Une ANOVA à mesures répétées bidirectionnelles a été effectuée pour toutes les comparaisons. *P < 0,05, **P < 0,01, ****P < 0,0001. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem Barres d'échelle, 200 μm. Les illustrations en c ont été créées avec BioRender (https://biorender.com).

Données source

Pour confirmer que ces projections étaient monosynaptiques et inhibitrices, nous avons injecté AAV-DIO-ChR2 dans le LS de souris Nt-Cre et effectué une électrophysiologie ex vivo de cellules entières avec une cartographie de circuit assistée par ChR2 des voies NTLS → NAc et NTLS → AHN. Nos données montrent que les deux voies sont monosynaptiques (avec TTX), inhibitrices (basées sur Cs internes, bloquées à 0 mV) et GABAa-dépendantes (SR-95531, Gabazine) (données étendues Fig. 10a, b). Nous avons également validé que 15 Hz de stimulation par la lumière bleue peuvent évoquer de manière fiable les neurones NTLS (Extended Data Fig. 10c). Parce qu'il a été rapporté que d'autres types de cellules dans le LS peuvent moduler les comportements de stress dans différentes conditions, nous avons testé si les neurones non-NT dans le LS jouent également un rôle dans les déficits sociaux induits par les traumatismes sociaux en injectant AAV-Flpo et AAV-CreOff -Virus FlpOn-ChR2 dans le LS de souris Nt-Cre pour marquer les neurones non-NT avec ChR2 (Extended Data Fig. 10d). Nous avons d'abord validé la spécificité de cette approche à l'aide de Multiplex ISH (données étendues Fig. 10e, f) et avons trouvé très peu de chevauchement entre ChR2 et NT. Nous avons ensuite validé les paramètres de stimulation pour ChR2 en utilisant l'électrophysiologie des tranches et confirmé que 15 Hz activaient de manière fiable les neurones non-NT dans le LS (Extended Data Fig. 10g). Nous avons ensuite stimulé des neurones non-NT dans le LS in vivo à 15 Hz pendant le test RI après CSDS et n'avons trouvé aucun effet sur l'interaction sociale (Extended Data Fig. 10h). Pris ensemble, ces résultats suggèrent que l'activation des projections NTLS inhibitrices de l'AHN et de la NAc est à la fois nécessaire et suffisante pour modifier l'investigation sociale et la préférence sociale des souris suite à une expérience sociale traumatisante.

De nombreuses composantes du comportement social, y compris ses propriétés gratifiantes, sont conservées au cours de l'évolution entre les humains et les rongeurs46,47. Bien qu'il soit bien établi que le stress social mène au développement de la dépression, de l'anxiété48 et du trouble de stress post-traumatique38, les circuits neuronaux qui médiatisent les conséquences négatives du stress social, en particulier en ce qui concerne la récompense sociale, ne sont pas bien définis. Nous considérons que les modèles de stress social précliniques sont impératifs pour ce travail de phase précoce afin de pouvoir définir les mécanismes potentiels du circuit de récompense sociale altérée par un traumatisme pour éclairer les futures études chez l'homme.

En utilisant une approche impartiale, nous avons identifié le LS comme l'une des régions les plus régulées activées chez les souris SUS mâles et femelles en réponse à une cible sociale normalement gratifiante, ce qui suggère qu'il pourrait s'agir d'une région particulièrement importante pour expliquer le social commun. déficits des deux sexes. Une analyse détaillée du LS a identifié une population spécifique de neurones de projection GABAergiques exprimant le neuropeptide neurotensine. Chez des souris non stressées, nous avons constaté que ces cellules étaient réactives lors de situations de menace, y compris en réponse à un comportement d'attaque agressif. Cependant, suite à un traumatisme social chronique chez des souris SUS, nous avons constaté que ces neurones généralisaient leurs réponses à des situations sociales non menaçantes, y compris lors d'interactions avec des souris juvéniles non agressives. Notamment, les neurones NTLS et Drd3+ exercent des fonctions opposées pour contrôler le comportement social après un stress (Fig. 4 et réf. 26). Les neurones Drd3 + et Nt + sont topographiquement distincts dans le LS et il est probable qu'ils aient des modèles de projection d'entrée / sortie différents, et forment peut-être même des connexions synaptiques distinctes au sein du LS. Ainsi, nous avons émis l'hypothèse que les neurones NTLS pourraient jouer un rôle unique dans la régulation de la récompense sociale en inhibant les centres de récompense en aval. En effet, des études de traçage antérograde ont identifié des centres de récompense connus, y compris le NAc et l'AHN, comme recevant une innervation modérée/dense des neurones NTLS, et l'activation de ces entrées a réduit l'interaction sociale et la récompense sociale dépendante du contexte avec un juvénile.

Parce que l'anxiété est bien connue pour inhiber les comportements sociaux adaptatifs; une question cruciale est de savoir si les neurones NTLS codent l'aversion sociale ou s'ils codent simplement un état généralisé d'anxiété qui altère les comportements sociaux. Selon nos données, les états anxieux généralisés mesurés par EPM/OFT sont séparables des déficits de comportement social : (1) lorsque nous stimulons les neurones NTLS chez des souris naïves au stress social, nous sommes capables de produire un déficit exploratoire généralisé dans l'EPM/OFT ( Données étendues Fig. 7); cependant, une telle stimulation n'induit pas l'évitement d'une cible sociale (Extended Data Fig. 6b). (2) Les souris RES et SUS du modèle CSDS présentaient des comportements anxieux dans l'OFT et l'EPM, mais seules les souris SUS présentaient un évitement social et une récompense sociale réduite. (3) Bien que le CVS produise une augmentation du comportement généralisé de type anxieux, il n'a aucun effet sur l'interaction sociale ou la récompense sociale (Extended Data Fig. 6e, f). Ainsi, en plus de la régulation des états d'anxiété généralisés, les neurones NTLS encodent des informations contextuelles sur les expériences passées stressantes/traumatiques pour guider les réponses comportementales futures.

Dans l'ensemble, nos résultats démontrent que, chez les souris SUS mâles et femelles, les cibles sociales gratifiantes sont perçues comme stressantes ou menaçantes, ce qui engage les circuits NTLS et altère le traitement des récompenses sociales d'une manière dépendante du contexte. Fait intéressant, dans des études sur des patients souffrant de dépression et de trouble d'anxiété sociale comorbide, il a été démontré que le traumatisme social augmente anormalement la représentation de la menace sociale49. De plus, les enfants qui ont subi un traumatisme présentent une sensibilité perceptuelle accrue à la menace, une mauvaise classification des émotions négatives et neutres et des biais d'attention envers les signaux liés à la menace50. Notre recherche fournit ainsi une base importante pour comprendre les mécanismes neuronaux sous-jacents au traitement de la récompense sociale post-traumatique. De futures études chez l'homme pour tester la pertinence des circuits LS dans la médiation de la perception de la menace sociale et de la sensibilité aux récompenses chez les victimes de traumatismes seront très instructives.

Des souris C57BL/6J de type sauvage, âgées de 7 à 8 semaines (mâles, 22 à 26 g ; femelles, 18 à 22 g ; Jackson Laboratory) ont été utilisées comme souris expérimentales dans les études CSDS ; Des souris C57BL/6J âgées de 4 à 6 semaines (Jackson Laboratory) ont été utilisées comme nouveaux intrus dans le test RI et le test sCPP ; Des souris mâles CD-1 (ICR) âgées de 16 à 24 mois (reproducteurs sexuellement expérimentés à la retraite; Charles River Laboratories) ont été utilisées comme agresseurs pour les CSDS mâles. Des souris ERα-Cre (017911, B6N.129S6(Cg)-Esr1tm1.1(cre)And/J; laboratoire Jackson) ont été croisées avec des femelles CD-1 pour obtenir des mâles F1, qui ont été utilisés comme agresseurs pour le CSDS femelle. Des souris homozygotes Nt-Cre (01752, B6;129-Ntstm1(cre) Mgmj/J; Jackson Laboratory) ont été croisées avec des souris WT C57BL/6 J, et la génération F1 a été utilisée comme souris expérimentales dans les études CSDS. Les compagnons de portée ont été assignés au hasard à des groupes expérimentaux. Toutes les souris ont été autorisées 1 semaine d'acclimatation aux installations de logement avant le début des expériences. Les souris WT CD-1 et F1 ERα-Cre étaient logées individuellement, les souris Nt-Cre et WT C57BL/6J étaient logées en groupes de trois à cinq. Toutes les souris ont été maintenues sur un cycle lumière/obscurité de 12/12 h (07 h 00 à 19 h 00) avec un accès ad libitum à la nourriture et à l'eau. Le logement et les salles expérimentales ont été maintenus à 20–22 °C et 40–60 % d'humidité. Des expériences ont été menées pendant la phase lumineuse. Les procédures ont été effectuées conformément au National Institutes of Health Guide for Care et approuvées par l'Use of Laboratory Animals et l'Icahn School of Medicine du Mount Sinai Institutional Animal Care and Use Committee. Des informations supplémentaires sur les souris utilisées dans cette étude peuvent être trouvées dans le Life Sciences Reporting Summary.

Le dépistage des agresseurs féminins11 et masculins10 pour les tests CSDS et SI a été effectué comme décrit précédemment. Les mâles expérimentaux étaient logés seuls après le CSDS, et les femelles étaient logées en groupe pendant le CSDS mais logées seules après la défaite. La défaite était interrompue si un intrus montrait des signes de blessure. Un CSDS entièrement masculin a duré 10 minutes par jour pendant 10 jours ; un CSDS entièrement féminin a duré 5 minutes par jour pendant 10 jours ; stCSDS a duré 5 et 2 min par jour pour les hommes et les femmes, respectivement, pendant 10 jours.

CVS a été modifié par rapport à nos travaux précédents51. Des souris mâles et femelles ont été assignées au hasard aux groupes CTRL et CVS. Les groupes CVS ont subi 28 jours de stress avec un facteur de stress par jour, les facteurs de stress consistant en 1 h de choc au pied (choc aléatoire 60 fois en 1 h), 1 h de suspension de la queue et 1 h de contention.

Des souris mâles ont été assignées au hasard aux groupes CTRL et CRS. Le groupe CRS a subi 28 jours de contrainte de contention d'une heure chaque jour. Pour le CRS juvénile à odeur appariée, les souris ont été retenues dans un dispositif de retenue de 50 ml et placées dans une nouvelle cage avec de la litière provenant d'une souris juvénile C57BL/6J du même sexe.

Les tests SI ont été effectués 24 h après la dernière défaite, comme décrit précédemment10. Les souris ont été habituées dans les salles de test pendant 1 h avant le test et tous les tests ont été effectués dans des conditions de lumière rouge. Des tests SI ont été effectués avec des souris explorant librement dans une arène sans cible (44 cm (w) × 44 cm (d) × 38 cm (h)) pendant 2,5 min, suivies d'une autre cible de 2,5 min (CD-1 ou ERα-Cre mouses) session au cours de laquelle les souris cibles étaient confinées dans une enceinte grillagée (10 cm (w) × 6,5 cm (d) × 38 cm (h)). La « zone d'interaction » de l'arène d'essai comprenait une zone rectangulaire de 14 cm × 24 cm faisant saillie de 8 cm autour de l'enceinte grillagée. Les « zones d'angle » comprenaient une zone de 9 cm × 9 cm faisant saillie à partir des deux joints d'angle opposés à l'enceinte en treillis métallique. Nous avons calculé le rapport SI comme le rapport du temps passé dans la zone d'interaction avec une souris CD-1 ou F1 ERα-Cre présente sur le temps passé avec la cible absente. Toutes les souris avec un rapport SI supérieur à 1 ont été classées comme souris RES et toutes avec un rapport inférieur à 1 comme souris SUS. Le rapport de coin a été calculé comme le rapport du temps passé dans la zone de coin avec une souris cible adulte CD-1 ou F1 ERα-Cre présente sur le temps passé lorsque la souris cible était absente.

Le test RI a été modifié à partir d'un protocole précédemment décrit52. Après la défaite et le SI, les souris ont été habituées dans les salles de test pendant 1 h avant le test, et tous les tests ont été effectués dans des conditions de faible luminosité. Des souris expérimentales ont été gardées dans leur cage d'accueil, placées sous une caméra Ethovision, habituées pendant 2 à 3 min avec le dessus de leur cage câblé retiré, puis des intrus (souris ou objets) ont été introduits dans leur cage d'accueil et autorisés à interagir librement pendant 5 min ( Le test RI pour la cohorte iDISCO+ a duré 10 min, pour stimuler au maximum l'expression de Fos). L'enquête sociale comprenait la quantité d'interaction active, y compris l'approche, le suivi rapproché et le reniflement. L'évitement social a été défini comme l'évasion d'une souris juvénile de la souris expérimentale lorsqu'elle est approchée et étudiée par la première. Une vitesse supérieure à 20 cm s–1 était considérée comme une fuite. Les souris SUS s'échappaient généralement à des vitesses de 20 à 65 cm s–1 immédiatement pour éviter les rencontres sociales après l'approche/l'enquête des juvéniles. Toutes les souris expérimentales montrant des comportements agressifs envers les juvéniles (environ 1%) ont été exclues des analyses. Tous les comportements RI ont été notés à l'aveugle par les expérimentateurs.

Le protocole sCPP, tel que publié précédemment53, comportait trois phases : prétest, conditionnement social et posttest. Les souris ont été habituées dans les salles de test pendant 1 h avant le conditionnement ou le test. Toutes les phases ont été menées dans des conditions de lumière rouge et d'insonorisation. L'appareil CPP (Med Associates) a une zone médiane neutre qui permet une entrée impartiale et deux chambres de conditionnement avec des murs et des sols différents. Le jour du prétest, les souris ont été introduites dans la chambre du milieu et autorisées à explorer librement dans les trois chambres de la boîte CPP pendant 20 min. Aucune différence de biais entre les groupes pour l'une ou l'autre des chambres n'a été trouvée, et les groupes de conditionnement ont été équilibrés de manière impartiale pour tenir compte de la préférence du côté de départ, comme décrit précédemment54. La phase de conditionnement consistait en quatre jours consécutifs avec deux séances de conditionnement chaque jour : pendant les séances appariées du matin (08h00-12h00), les souris expérimentales étaient confinées dans la chambre assignée pendant 15 min avec un nouveau C57BL juvénile de même sexe. intrus 6J ; au cours de la session non appariée de l'après-midi (13h00-17h00), les souris ont été placées dans la chambre opposée sans cible sociale pendant 15 min. Pour le sCPP femelle, pendant le conditionnement, les souris juvéniles étaient confinées dans une tasse en treillis métallique, ce qui, selon nous, était nécessaire pour que les femelles forment le CPP, alors que les mâles ne formaient une préférence que lorsqu'ils pouvaient interagir librement avec le juvénile à l'extérieur de la tasse. Tous les groupes ont été contrebalancés pour la chambre de conditionnement. Le jour du post-test, des souris expérimentales ont été placées dans la chambre médiane de l'appareil CPP et autorisées à explorer librement toutes les chambres pendant 20 min. La durée passée dans l'un ou l'autre contexte a été utilisée pour mesurer le RPC. Pour les expériences de chimiogénétique, le CNO a été administré pendant les séances de conditionnement complètes. L'analyse comportementale des données sCPP a été réalisée en évaluant (1) le CPP soustrait (durée de la phase post-test passée dans la chambre appariée par l'intrus moins la durée de la phase de test passée dans la chambre non appariée par l'intrus, en tenant compte uniquement du comportement de la session de test) ; et (2) les durées de groupe et individuelles dans les sessions de pré-test et de post-test.

Des tests de reconnaissance d'objets nouveaux (NOR) et de localisation d'objets ont été effectués comme décrit précédemment55. Les souris mâles ont été habituées dans la salle de test pendant 1 h avant le test, puis placées au milieu d'un champ ouvert en plexiglas vide (45 cm (l) × 45 cm (p) × 38 cm (h)) sous une lumière tamisée pendant 10 min (phase d'accoutumance). Vingt minutes après la phase d'accoutumance, les souris ont été placées dans le même champ ouvert avec deux objets (A et B) et laissées explorer pendant 10 min. Les souris ont ensuite été replacées dans leur cage d'accueil pendant 20 minutes avant d'être remises dans le champ ouvert avec l'objet B remplacé par un nouvel objet, C. Les souris ont été autorisées à explorer pendant 10 minutes. Après le test NOR, les souris ont été transférées dans leur cage d'origine pendant 20 minutes avant d'être renvoyées dans le champ ouvert, dans lequel l'emplacement de l'objet A a été modifié et le temps passé à interagir a été enregistré. Le temps passé avec l'objet ou l'emplacement nouveau ou familier a été enregistré et noté par le logiciel Ethovision.

L'EPM a été réalisée comme décrit précédemment11. Les souris mâles ont été habituées dans la salle de test pendant 1 h avant le test, puis placées au milieu de l'EPM en plexiglas sous une lumière rouge pendant 5 min. Chaque bras du labyrinthe mesurait 12 × 50 cm2. Le comportement a été suivi à l'aide de Noldus Ethovision (technologies Noldus Interactive). Le temps total passé dans les bras ouverts et fermés a été mesuré.

Le test en plein champ a été effectué comme décrit précédemment11. Les souris mâles ont été habituées dans la salle de test pendant 1 h avant le test puis placées au milieu des arènes en plexiglas (44 × 44 × 35 cm3) sous une lumière rouge pendant 10 min. Le comportement a été suivi à l'aide de Noldus Ethovision (Noldus Interactive technologies) pour enregistrer la distance totale parcourue, ainsi que le temps passé au centre (22 × 22 cm2) par rapport aux zones extérieures.

Le test d'enfouissement du marbre a été effectué comme décrit précédemment56. Les souris mâles ont été habituées dans la salle de test pendant 1 h avant le test. De la litière fraîche et non parfumée en épis de maïs pour souris (profondeur 5 cm) a été placée dans des cages à rats standard (26 cm (l) × 48 cm (p) × 20 cm (h)) avec des couvercles filtrants, et une autre cage a été insérée sur la surface de la literie pour créer des lignes parallèles sur la surface de la literie qui pourraient être utilisées pour le placement du marbre. Des billes jouets en verre standard (1,6 cm de diamètre) ont été placées doucement sur la surface de la litière en cinq rangées de quatre. Les billes ont été lavées dans de l'éthanol à 70 %, rincées à l'eau distillée et séchées avant chaque utilisation. Les souris ont été introduites dans le coin de la cage pour explorer pendant 30 min avec le dessus du filtre recouvert sur la cage. Une bille était considérée comme enterrée si les deux tiers de sa surface étaient recouverts de litière. Un test d'enfouissement de marbre de 2 jours manipulé par DREADD a été réalisé en utilisant une conception intra-sujets; les souris ont reçu soit du CNO soit du véhicule de manière équilibrée, et ainsi elles ont reçu du CNO ou du véhicule le premier jour et l'alternative le deuxième jour.

Les expériences RTPP ont été réalisées comme décrit précédemment54 : les souris ont été placées au centre d'une arène (44 cm (l) × 44 cm (p) × 35 cm (h)) avec un diviseur central et autorisées à explorer librement pendant 20 min. Le temps passé de chaque côté a été enregistré à l'aide de Noldus Ethovision (technologies Noldus Interactive). Pendant les 10 premières minutes du test, un côté du champ ouvert a été associé à des impulsions de 20 ms de stimulation par la lumière bleue de 15 Hz (473 nm, 7 à 10 mW, 1 s allumé, 1 s éteint). Pendant les 10 secondes minutes du test, la stimulation laser a été couplée avec le côté opposé de l'arène ; cela a été fait pour minimiser le biais inhérent vers un côté de l'arène. Il y avait un intervalle d'une minute entre les deux phases. Le temps total passé dans les côtés non stimulé et stimulé a été calculé et analysé.

Pour l'immunohistochimie et iDISCO +, les souris ont été euthanasiées par injection d'hydrate de chloral à 10 % et perfusées par voie transcardiaque avec du PBS 1 × glacé (pH 7, 4), suivies d'une fixation avec du paraformaldéhyde froid à 4 % dans du PBS 1 ×. Les cerveaux ont été postfixés pendant 12 h dans le même fixateur à 4 °C. Pour l'immunohistochimie, des coupes coronales ont été préparées sur un vibratome (Leica) à 50 μm pour évaluer le placement viral et pour l'immunohistochimie. Pour l'ISH, les cerveaux de souris ont été rapidement prélevés et congelés dans de l'isopentane à -30 ° C pendant 5 à 10 s, puis conservés à -80 ° C jusqu'à la coupe à 15 μm à l'aide d'un cryostat (Leica). Les animaux injectés avec des virus AAV ont été perfusés au moins 4 semaines après l'injection ; les animaux injectés avec H129ΔTK-TT ont été perfusés 48 et 70 h après l'injection.

Pour Fos IHC, les tranches ont été incubées pendant 2 h dans une solution de blocage (3 % de sérum d'âne normal, 0,3 % de Triton X-100 dans du PBS) puis incubées pendant une nuit dans un anticorps primaire (souris anti-Fos, 1:1 000 (Santa Cruz Biotechnology, C -10)) à 4 °C. Les tranches ont ensuite été lavées dans du PBS pendant 3 × 20 min et incubées dans des anticorps secondaires (Cy2 (n° 711-225-152), Cy3 (n° 711-165-152), Cy5 (n° 711-175-152), AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L), 1:1 000 (Jackson ImmunoResearch)) pendant 2 h à température ambiante, puis lavé dans du PBS pendant 3 × 20 min avant coloration au DAPI (1 μg mL–1, Sigma) pour 20 min. Les sections ont ensuite été montées avec Eco-Mount (sciences de la vie) et recouvertes d'une lamelle (Fisher). Pour l'analyse Fos, un grossissement de × 20 et une fonction de balayage de tuiles ont été utilisés pour acquérir toute la région d'intérêt. L'analyse des cellules Fos-positives a été réalisée à l'aide de Fiji (NIH)57. Pour les images représentatives de l'infection virale, les images ont été acquises à un grossissement ×10 à l'aide de la fonction de balayage de tuiles. Pour l'ISH, les kits fluorescents RNAscope Multiplex (Advanced Cell Diagnostics) ont été utilisés conformément aux instructions du fabricant. En bref, des cerveaux fraîchement congelés ont été montés sur lame à 15 μm d'épaisseur, fixés pendant 15 min dans du PFA froid à 4 % et déshydratés en série avec 50, 70 et 100 % EtOH/H2O pendant 2 min chacun, suivis de 20 min de protéase IV (RNAscope) traitement. Sondes propriétaires (Advanced Cell Diagnostics) pour Fos (316921, n° d'accès NM_010234.2) ; Sst (404631-C2, n° d'accès NM_009215.1), Gad67 (400951-C2, n° d'accès NM_008077.4), Oxtr (412171-C2, n° d'accès NM_001081147.1), Drd3 (447721-C, n° d'accès .NM_007877.1) ou Crhr2 (413201-C2, n° d'accession NM_009953.3); Nt (420441-C3, n° d'accès NM_024435.2) ont été hybridés à 40 °C pendant 2 h puis soumis à une série d'étapes d'amplification à 40 °C (1-FL, 30 min ; 2-FL, 15 min ; 3 -FL, 30 min ; 4-FL, 15 min). Le réactif Alt-A a été utilisé pour la quatrième étape d'amplification, avec le canal 1 à 488 nm, le canal 2 à 550 nm et le canal 3 à 647 nm. Enfin, les lames ont été traitées pendant 1 min avec du DAPI et immédiatement recouvertes d'Eco-Mount. Toutes les tranches ont été imagées à l'aide d'un microscope confocal Zeiss LSM 780. Les cellules et les Fos de toutes les images ISH et IHC ont été comptés à l'aveugle dans tous les groupes.

Le protocole de coloration iDISCO+ a été modifié à partir de http://www.idisco.info. Des cerveaux entiers fixés ont été incubés avec l'anticorps Fos primaire (n° 226003, 1:1 000, Synaptic Systems) et l'anticorps secondaire IgG anti-lapin d'âne (H+L) hautement adsorbé par croisement, Alexa Fluor 647 (n° A-31573 , 1:1 000, Thermo Fisher Scientific) pendant 7 jours chacun. Un microscope à feuille de lumière LaVision avec corps de zoom a été utilisé pour le balayage sagittal du demi-cerveau, avec une mise au point dynamique et une taille de pas de 4 um. Les cerveaux effacés ont été traités comme décrit précédemment à l'aide de ClearMap12. Les cellules Fos+ ont été quantifiées à l'aide du module de détection cellulaire, avec des paramètres de détection cellulaire optimisés et validés en fonction des paramètres d'intensité et de forme du signal. Le canal d'autofluorescence a été aligné sur le cadre de coordonnées communes de l'Institut Allen à l'aide de la boîte à outils Elastix. Les zones cérébrales ont été regroupées dans leur région mère (par exemple, les septums latéraux rostroventral, caudodorsal et ventral ont été combinés dans le « noyau septal latéral »). Ces décisions ont été prises avant l'analyse. Pour comparer le nombre de cellules chez les animaux RES et SUS, une régression binomiale négative a été appliquée à l'aide de la fonction glm.nb du package MASS dans R. Les classifications de groupe ont été codées fictives (0 pour le groupe SUS et 1 pour le groupe RES). Les coefficients de vraisemblance maximale α et β ont été déterminés par des moindres carrés itératifs repondérés. Un β significatif signifie que le statut du groupe est lié au nombre de cellules dans la région d'intérêt spécifiée. Les valeurs z dans Extended Data Fig. 2i correspondent à ce coefficient β, normalisé par son écart type d'échantillon. Les valeurs P ont été corrigées pour les comparaisons multiples à l'aide de la procédure Benjamini-Hochberg afin de réduire le taux de fausses découvertes. Les valeurs Q inférieures à 0,05 ont été considérées comme significatives.

Des souris Nt-Cre (âgées de 4 à 5 semaines) ont été anesthésiées par injection intrapéritonéale avec un mélange de kétamine HCl (100 mg kg–1) et de xylazine (10 mg kg–1) et positionnées sur un instrument stéréotaxique (David Kopf Instruments). Dans le LS (de bregma : AP +0,7 mm ; ML ±0,4 mm ; DV -3,0 mm), 0,5 μL ​​de virus a été perfusé bilatéralement à l'aide d'aiguilles Hamilton de calibre 33 pendant 5 min, les aiguilles étant laissées en place pendant 5 min après l'injection. . Pour l'administration du virus DREADD, 0,5 μl de AAV8-hSyn-DIO-hM3D-mCherry (2,0 × 1012 vg mL–1, n° 44361-AAV8, Addgene), AAV9-hSyn-DIO-hM4D-mCherry (2,0 × 1012 vg mL–1 –1, n° 44362-AAV9, Addgene) ou AAV9-hSyn-DIO-mCherry (2,0 × 1012 vg mL–1, n° 50459-AAV9, Addgene) a été injecté dans le LS. Pour le tracé antérograde, 0,5 μL de AAV9-hSyn-DIO-EYFP (2,0 × 1012 vg mL–1, n° 50457-AAV9, Addgene) ou 0,15 μl de H129ΔTK-TT (4,0 × 109 vg mL–1, Center for Neuroanatomy avec des virus neurotropes) a été injecté unilatéralement dans le LS. Pour le traçage rétrograde des régions en aval du LS, 0,5 μL d'AAV-DIO-EGFP/tdTomato rétrograde (2,0 × 1012 vg mL–1, n° 50457-AAVrg et 28306-AAVrg, Addgene) ont été injectés dans la partie médiale du NAc ( de bregma : AP +1,5 mm ; ML ±0,5 mm ; DV -4,4 mm), AHN (de bregma : AP -0,7 mm ; ML ±0,5 mm ; DV -5,0 mm) ou PAG (de bregma : AP -4,2 mm ; ML ±0,2 mm ; DV -2,5 mm). Pour l'injection de CTB, 0,5 μL de sous-unité B de la toxine du choléra conjuguée à Alexa Fluor 488 (1,0 mg mL–1, n° C-34775, Thermo Fisher) ont été injectés dans le NAc (à partir du bregma : AP +1,5 mm ; ML ±0,5 mm ; DV -4,4 mm), 0,5 μL de la sous-unité B de la toxine du choléra conjuguée à Alexa Fluor 555 (1,0 mg mL–1, n° C-34776, Thermo Fisher) a été injectée dans l'AHN (de bregma : AP -0,7 mm ; ML ±0,5 mm ; DV -5,0 mm) et 0,5 μL ​​d'Alexa Fluor 647-conjugated Cholera Toxin Subunit B (1,0 mg mL–1, no. C-34778, Thermo Fisher) ont été injectés dans le PAG (de bregma : AP -4,2 mm ; ML ±0,2 mm ; DV -2,5 mm). Pour l'optogénétique, 0,5 μL d'AAV9-EF1a-DIO-EYFP (3,0 × 1012 vg mL–1, n° 27056-AAV9, Addgene), AAV9-Ef1a-DIO eNpHR3.0-EYFP (3,0 × 1012 vg mL–1, n° 26966-AAV9, Addgene) ou AAV9-EF1a-DIO-ChR2-EYFP (3,0 × 1012 vg mL–1, n° 20298-AAV9, Addgene) a été injecté soit dans le LS (stimulation du corps cellulaire) soit dans les régions en aval ( stimulation terminale). Pour l'injection de virus CreOff, AAV-EF1a-Flpo (2,0 × 1012 vg mL–1, n° 55637-AAV1, Addgene) et AAV-nEF-Coff/Fon-ChR2(ET/TC)-EYFP (2,0 × 1012 vg mL –1, n° 137141-AAV8, Addgene) ont été mélangés 1:1 et injectés dans le LS. Toutes les injections d'AAV ont été effectuées 3 semaines avant la perfusion ou les expériences comportementales. Pour les agresseurs utilisés dans les CSDS femelles, nous avons ciblé le VMHvl des souris ERα-Cre F1 comme décrit précédemment11,58. Pour la FP, 0,5 μL de virus AAV9-CAG-FLEX-G6s/EGFP (2,0 × 1012 vg mL–1, n° 100842-AAV9, 51502-AAV9 Addgene) ont été injectés unilatéralement dans le LS. Pour les expériences optogénétiques (ChR2) et FP, des canules (ChR2 : MFC_200/240-0.22_3mm_MF1.25_FLT ; FP : MFC_200/250-0.57_3mm_MF1.25_FLT) ont été implantées en même temps que l'administration virale (pour le LS local, des fibres ont été implantées 0,2 mm au-dessus du site d'injection). Pour les expériences optogénétiques (ChR2 et eNpHR3.0) sur la stimulation terminale NTLS, des canules (MFC_200/240-0.22_MF1.25_FLT, 5 mm pour NAc/AHN, 3 mm pour PAG) ont été implantées dans le NAc (de bregma : AP +1,5 mm ; ML ±1,5 mm ; DV −4,4 mm, angle de 15°), l'AHN (de bregma : AP −0,7 mm ; ML ±1,5 mm ; DV −4,8 mm, angle de 10°) ou PAG (de bregma : AP − 4,2 mm ; ML ±0,2 mm ; DV -2,3 mm). Pour une fixation sûre de la fibre optique, du ciment dentaire (ciment Grip ; Dentsply) a été ajouté au crâne et autour des fibres.

Pour les souris ERα-Cre (utilisées pour le CSDS femelle), du CNO (1 mg kg–1, Tocris) a été administré par voie intrapéritonéale 30 min avant le CSDS11. Pour l'OFT, l'EPM et les tests d'enfouissement de marbre, SI et RI, le CNO a été administré 30 min avant le test ; pour le sCPP, le CNO a été administré 30 minutes avant chaque séance de conditionnement.

Pour la stimulation par la lumière bleue (ChR2) et orange (eNpHR3.0), des fibres optiques (BFP(2)_200/220/900-0.22_4m_FCM-2xMF1.25, lentilles doriques) ont été connectées soit à une diode laser bleue de 473 nm (pas . BCL-473-050-M, Crystal Laser) ou une diode laser orange 589 nm (n° MGL-III-589-50mW, Opto Engine LLC) à l'aide d'un cordon de raccordement avec un adaptateur FC/PC (n° MFP_200/240 /900-0.22_4m_FC-MF1.25, Lentilles Doriques). Un générateur de fonctions (n° 33220A, Agilent Technologies) a été utilisé pour générer des impulsions de lumière bleue de 20 ms à 15 Hz, 1 s allumé/1 s éteint pour toutes les expériences ChR2. Une lumière orange constante a été utilisée pour les expériences eNpHR3.0 pendant le test d'intrus résident de 5 minutes. Pour les études sCPP, la lumière orange a été délivrée selon un schéma de 4 min allumé/1 min éteint. L'intensité de la lumière délivrée au cerveau était de 7 à 10 mW. Ces paramètres sont cohérents avec les protocoles précédemment validés et publiés24. Pour tous les tests d'optogénétique, les souris expérimentales ont été habituées à patcher les cordons pendant 2 jours avant les tests en RI. Pour les expériences RI, les souris ont été testées sur 2 jours, contrebalancées dans des conditions d'activation et de désactivation du laser. Pour les tests sociaux de RPC, la lumière a été fournie pendant la séance de conditionnement social. Pour le test RTPP, la diffusion de la lumière bleue a été contrôlée par TTL de Noldus Ethovision (Noldus Interactive technologies).

AAV9-hSyn-DIO-EYFP (0,5 ul, 2,0 × 1012 vg mL–1, Addgene) a été injecté bilatéralement dans le LS de souris Nt-Cre mâles âgées de 4 semaines. Deux à trois semaines après l'injection, les souris ont subi un CSDS. Avant la préparation des tranches, toutes les souris ont été exposées à un intrus juvénile de même sexe âgé de 4 à 6 semaines pendant 5 min. Environ 20 minutes après le test RI, les souris ont été anesthésiées à l'aide d'isoflurane. Le cerveau a été rapidement extrait et des sections coronales (250 µm) découpées à l'aide d'un Compresstome (n° VF-210-0Z, Precisionary Instruments) dans du liquide céphalo-rachidien artificiel à base de saccharose (SB-aCSF) froid (0 à 4 °C) contenant ( en mM) : 87 NaCl, 2,5 KCl, 1,25 NaH2PO4, 4 MgCl2, 23 NaHCO3, 75 saccharose et 25 glucose. Après 60 min à 32 °C pour la récupération, les tranches ont été maintenues dans du FSCa oxygéné (95 % CO2/5 % O2) contenant (en mM) : 130 NaCl, 2,5 KCl, 1,2 NaH2PO4, 2,4 CaCl2, 1,2 MgCl2, 23 NaHCO3 et 11 glucose à température ambiante pour le reste de la journée, et transféré dans une chambre d'enregistrement perfusée en continu à 2–3 mL min–1 avec du LCR oxygéné. Des pipettes patch (4–7 MΩ) ont été tirées à partir de verre borosilicaté à paroi mince à l'aide d'un extracteur de micropipette (n° P-97, Sutter Instruments) et remplies d'une solution intrapipette à base de gluconate de K (KGlu) contenant (en mM) : 116 KGlu, 20 HEPES, 0,5 EGTA, 6 KCl, 2 NaCl, 4 ATP et 0,3 GTP et 2 mg mL–1 biocytine (pH ajusté à 7,2). Les cellules ont été visualisées à l'aide d'un microscope droit avec une lentille IR-DIC et éclairées avec une source de lumière blanche (Scientifica). Un éclairage LED de 470 nm (n° pE-300ultra, refroidi) à travers l'objectif du microscope a été utilisé pour la visualisation des cellules eYFP+ (à l'aide d'un cube de filtre passe-bande, Olympus). L'excitabilité a été mesurée en mode pince de courant par injection d'étapes incrémentielles de courant (0 à 100 pA, + 10 pA à chaque étape). Pour l'enregistrement des courants postsynaptiques inhibiteurs évoqués optiquement (oIPSC), AAV9-EF1a-DIO-ChR2-eYFP (0,5 µL, 3,0 × 1012 vg mL–1, Addgene) a été injecté bilatéralement dans le LS d'un mâle Nt- âgé de 4 semaines. Souris Cre. 5 à 8 semaines après l'injection, des tranches de cerveau coronales de NAc/AHN ont été préparées comme décrit ci-dessus et les neurones NAc/AHN ont été enregistrés en mode voltage-clamp en utilisant une solution interne contenant (en mM) : 120 Cs-méthanesulfonate, 10 HEPES, 10 Na-phosphocréatine, 8 NaCl, 5 TEA-Cl, 4 Mg-ATP, 1 QX-314, 0,5 EGTA et 0,4 Na-GTP. Les terminaux NTLS ont été stimulés à travers l'objectif du microscope x40 (15 Hz, 5 ms par impulsion, 470 nm ; n° pE-300ultra, CoolLed). Les oIPSC ont été enregistrés à 0 mV en présence de tétrodotoxine (TTX, 1 μM, Tocris) pour sonder les effets monosynaptiques. Les oIPSC ont été bloqués par l'application d'un bain de gabazine (n° SR-95531, 10 μM, Tocris) confirmant la nature GABAergique du contact synaptique. Des enregistrements de cellules entières ont été effectués à l'aide d'un amplificateur patch-clamp (Axoclamp 200B, Molecular Devices) connecté à un système d'acquisition Digidata 1550 LowNoise (Molecular Devices). Les signaux ont été filtrés passe-bas (Bessel, 2 kHz) et collectés à 10 kHz à l'aide du logiciel d'acquisition de données pClamp 11 (Molecular Devices). Les enregistrements électrophysiologiques ont été extraits et analysés à l'aide de Clampfit (Molecular Devices). Tous les groupes ont été contrebalancés par des jours après la défaite. Tous les enregistrements ont été effectués à l'aveugle des conditions expérimentales.

La photométrie des fibres a été réalisée conformément au manuel de Neurophotometrics et aux protocoles publiés59. Un cordon de raccordement à fibre optique (n° MFP_200/240/900-0.48_3m_FC-MF1.25, lentilles doriques) a été fixé à la canule implantée avec des manchons en zircone cubique recouverts d'un tube rétractable de couleur foncée. L'autre extrémité du câble à fibre optique était couplée à un port LED Neurophotometrics. Le programme open-source Bonsai a été utilisé pour contrôler le système; Des lumières LED de 470 et 415 nm ont été utilisées pour le signal GCaMP6s et la mesure d'autofluorescence. La lumière à l'extrémité de la fibre variait de 40 à 80 μW et était constante d'un essai à l'autre au cours des jours d'essai. L'enregistrement simultané de 40 ips à partir des canaux 470 et 415 nm a été réalisé phase à phase et visualisé via Bonsai. Trois semaines après l'injection du virus et l'implantation de la virole, lorsque les souris avaient environ 8 semaines, elles ont subi un CSDS et un SI ; ils ont ensuite été habitués au patch cord pendant 2 jours et la fluorescence du Ca2+ a été enregistrée lors du test RI, de la séance de conditionnement social CPP, des tests de stress et de récompense alimentaire. Une fois connectées à l'appareil, les souris ont été autorisées à se reposer et à s'habituer pendant 3 à 5 minutes avant de commencer. Pour le test RI, nous avons enregistré la fluorescence du Ca2+ pendant 2 min d'activité de base sans intrus, suivies de 5 min d'exposition à l'intrus. La récompense alimentaire a été effectuée dans un champ ouvert et des tasses de beurre de cacahuète ont été placées dans l'arène près des coins. Tous les événements de morsure de nourriture ont été notés manuellement. Le codage personnalisé MATLAB a été utilisé pour l'analyse du signal. Le canal de 415 nm a servi de canal de contrôle et a été soustrait du canal GCaMP6s pour éliminer les effets d'autofluorescence, de blanchiment et de mouvement. Le changement de fluorescence (ΔF/F) a été calculé comme le pourcentage du signal de fluorescence moyen du signal GCaMP6s. En général, ces artefacts de mouvement ont eu très peu d'effet sur le signal global de GCaMP6s. Les données comportementales ont été alignées sur les données d'enregistrement de fluorescence en divisant les images vidéo comportementales avec les images de signal GCaMP6s. Pour l'analyse de l'activité LS GCaMP6s lors de comportements discrets dans le test RI, la moyenne ΔF / F (%) dans les 2 s avant et après un événement discret (enquête sociale passive) a été comparée. Une enquête sociale passive a été déterminée à se produire au moment de l'approche sociale passive initiée par l'intrus.

Tous les détails statistiques peuvent être trouvés dans les légendes des figures, y compris le type d'analyse statistique utilisée, les valeurs P, n, ce que n représente, les degrés de liberté et les valeurs t ou F. Tous les tests t, l'ANOVA unidirectionnelle et l'ANOVA bidirectionnelle répétée ont été effectués à l'aide du logiciel GraphPad Prism (GraphPad Software Inc.). L'analyse ANOVA unidirectionnelle a été suivie du test de comparaisons multiples de Tukey, et l'analyse ANOVA à mesures répétées bidirectionnelles a été suivie du test de comparaisons multiples de Šídák. Des différences statistiquement significatives sont indiquées dans chaque figure (*P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001). Pour les valeurs P détaillées, veuillez consulter Données source. Les analyses de la coloration Fos, des données ISH et des vidéos comportementales pendant le test RI ont été réalisées en aveugle des conditions expérimentales. La taille des échantillons a été choisie en fonction des expériences précédentes. Pour les tableaux de données étendues et le tableau supplémentaire, les valeurs P ont été corrigées pour les comparaisons multiples à l'aide de la procédure Benjamini-Hochberg afin de réduire le taux de fausses découvertes. Les valeurs Q inférieures à 0,05 ont été considérées comme significatives pour tous les tableaux de données étendues.

La figure 2c et les données étendues de la figure 3i ont été répétées dans trois cohortes distinctes par sexe, toutes montrant des résultats similaires. La figure 5a,b (à droite) a été répétée dans trois cohortes masculines distinctes (n = 6) et dans une cohorte féminine (n = 2), toutes montrant des résultats similaires. Données étendues La figure 3j a été répétée deux fois chez les deux sexes, les deux montrant des résultats similaires. Données étendues La figure 6a a été répétée dans quatre cohortes distinctes des deux sexes, toutes montrant des résultats similaires. Figs de données étendues. 8a,d (à droite) et 10e ont été répétés deux fois chez les hommes uniquement, les deux cohortes montrant des résultats similaires. Données étendues La figure 8b a été répétée trois fois, toutes montrant des résultats similaires.

Schémas des tranches de cerveau dans les Fig. 2g,i,j, 3a, 4a et 5a,b et données étendues Figs. 4d,f,g, 7c, 8a,b,d et 10d ont été adaptés de Allen Brain Atlas Reference à l'aide d'Adobe Illustrator.

De plus amples informations sur la conception de la recherche sont disponibles dans le résumé des rapports sur le portefeuille Nature lié à cet article.

Toutes les données brutes sur les comportements des animaux, ISH et IHC sont disponibles sous forme de fichiers de données source. La base de données Allen Brain Atlas ISH a été utilisée pour rechercher des marqueurs moléculaires potentiels dans le LS.

Tout le code MATLAB pour l'analyse d'imagerie Ca2+ et le code Python pour l'analyse iDISCO+ peuvent être obtenus sur github (https://github.com/nyclong/2021-07-11642-Nature.git).

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Nous remercions A. Smith pour son aide avec le protocole iDISCO+ et l'analyse ClearMap, M. Flanigan pour ses conseils sur la validation du test sCPP, N. Tzavaras, K. Cialowicz et G. Doherty de Mount Sinai Microscopy CoRE pour son aide avec l'imagerie par feuille de lumière et N Rome et S. Gaydos pour leur aide avec le découpage du cerveau. Cette recherche a été financée par les National Institutes of Health des États-Unis. R01MH114882, R01MH127820, R01MH104559, R01MH120514 et R01MH120637 (SJR), Fondation de recherche sur le cerveau et le comportement (no. 30233 à LL, no. 29104 à FC et no. 29699 à CM), Instituts de recherche en santé du Canada (no. 201811MFE-4 14896- 231226 à KLC) et NIH Virus Center (octroi n° P40 OD010996).

Nash Family Department of Neuroscience, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, New York, NY, États-Unis

[ PubMed ] Long Li, Romain Durand-de Cuttoli, Antonio V. Aubry, C. Joseph Burnett, Flurin Cathomas, Lyonna F. Parise, Kenny L. Chan, Yusuke Shimo & Scott J. Russo

Friedman Brain Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, New York, NY, États-Unis

[ PubMed ] Long Li, Romain Durand-de Cuttoli, Antonio V. Aubry, C. Joseph Burnett, Flurin Cathomas, Lyonna F. Parise, Kenny L. Chan, Carole Morel, Chongzhen Yuan, Yusuke Shimo, Hsiao-yun Lin, Jun Wang et Scott J. Russo

Département des sciences pharmacologiques, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, New York, NY, États-Unis

Carole Morel

Département de neurologie, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, New York, NY, États-Unis

Chongzhen Yuan, Hsiao-yun Lin et Jun Wang

James J Peters VA Medical Center, Recherche et développement, New York, NY, États-Unis

Chongzhen Yuan, Hsiao-yun Lin et Jun Wang

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LL et SJR ont conçu le projet. Les chirurgies ont été réalisées par LL, LFP, CM et RDC La préparation des tissus a été réalisée par LL, CJB, FC, LFP, KLC, YS et H.-YL IHC/FISH, l'imagerie/analyse par microscopie, la collecte et l'analyse des données de photométrie des fibres ont été réalisées par LL Les expériences comportementales ont été réalisées par LL et CY Les expériences d'électrophysiologie ont été réalisées par RDC Les procédures iDISCO+ ont été réalisées par LL Les données iDISCO+ ont été analysées par AVAJW a fourni une contribution intellectuelle et édité le manuscrit. Les résultats ont été analysés et interprétés par LL, RDC, AVA et SJR Le manuscrit a été rédigé par LL, RDC, AVA et SJR et édité par tous les auteurs.

Correspondance à Scott J. Russo.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

Nature remercie Dayu Lin, Moriel Zelikowsky et le(s) autre(s) relecteur(s) anonyme(s) pour leur contribution à la relecture par les pairs de ce travail. Les rapports des pairs examinateurs sont disponibles.

Note de l'éditeur Springer Nature reste neutre en ce qui concerne les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

a—f, les souris SUS présentent un rapport de coin plus élevé (One-Way ANOVA, femelle, F (2, 31) = 29,62, P < 0,0001, n = 10 (CTRL), 12 (RES), 12 (SUS) (a) , hommes, F (2, 46) = 17,58, P < 0,0001, n = 10 (CTRL), 13 (RES), 26 (SUS) (d)), tout en ne montrant aucun déficit d'activité locomotrice (One-Way ANOVA, femme , F (2, 31) = 0,8416, P = 0,4406 (b), hommes, F (2, 46) = 0,8416, P = 0,4376, (e)) pendant le test SI et montrant une latence plus longue au premier combat social (Un- Way ANOVA, femme, F (2, 31) = 8,399, P = 0,0012, (c), hommes, F (2, 46) = 16,63, P < 0,0001, (f)) pendant le test RI. g—l, Corrélation entre le ratio SI et le temps d'investigation sociale (femme, R2 = 0,1728, P = 0,0145 (g), homme, R2 = 0,1958, P = 0,0015 (j)), évitement social (femme, R2 = 0,3399, P = 0,0003 (h), homme, R2 = 0,1847, P = 0,0021 (k)) et latence au premier combat social (femme, R2 = 0,1464, P = 0,0255 (i), homme, R2 = 0,1366, P = 0,0090 (l )). m—r, Corrélation entre le score CPP et le temps d'enquête sociale (femme, R2 = 0,2818, P = 0,0012 (m), homme, R2 = 0,1533, P = 0,0054 (p)), évitement social (femme, R2 = 0,1995, P = 0,0081 (n), homme, R2 = 0,0911, P = 0,0351 (q)) et latence au premier épisode social (femme, R2 = 0,3065, P = 0,0007 (o), homme, R2 = 0,0318, P = 0,2200 (r )). s, le score CPP soustrait des différentes étapes du cycle de l'oestrus féminin montre que l'étape du cycle n'a aucun effet sur la formation du RPC social (ANOVA à un facteur, F (3, 20) = 0,5148, P = 0,6768, n = 4 (Proestrus), 6 (oestrus), 4 (metestrus), 10 (diestrus)). t, Score CPP soustrait de différentes cibles sociales pour le CPP social féminin. u, Distribution des différents paramètres de comportement des animaux CTRL, RES, SUS. ns, non significatif. * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001, **** P < 0,0001. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem

Données source

a, Schéma de principe du nouveau test de reconnaissance d'objets (NOR) et du nouveau test de localisation (NLT). b, temps d'investigation d'un nouvel objet (ANOVA à un facteur, F (2, 29) = 3,041, P = 0,0633, n = 10 (CTRL), 9 (RES), 13 (SUS)) et c, temps d'investigation d'un nouvel emplacement ( ANOVA à un facteur F (2, 29) = 0,5601, P = 0,5772). d, Schéma de principe de l'ordre de test de comportement inversé. e, score CPP soustrait (One-Way ANOVA, F (2, 22) = 3,984, P = 0,0334), temps d'enquête sociale (F (2, 22) = 8,267, P = 0,0021), évitement social (F (2, 22) = 9,919, P = 0,0008) et ratio SI (F (2, 22) = 18,32, P < 0,0001, n = 8 (CTRL), 7 (RES), 9 (SUS). f, g, Paramètres comportementaux sociaux après regroupement par score CPP, (f) femmes, ratio SI (test t bilatéral, t = 1,660, df = 32, P = 0,1067), temps d'enquête sociale (t = 3,788, df = 32, P = 0,0006) , évitement social (t = 3,001, df = 32, P = 0,0052), latence (t=3,204, df = 32, P = 0,0031), n ​​= 11 (RPC-), 23 (RPC+). (g) hommes, Rapport SI (test t bilatéral, t = 2,298, df = 47, P = 0,0261), temps d'enquête sociale (t = 2,868, df = 47, P = 0,0062), évitement social (t = 2,545, df = 47 , P = 0,0143), latence (t = 1,438, df = 47, P = 0,1570), n = 21 (CPP-), 28 (CPP+). ns, non significatif, * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001, **** P < 0,0001. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem

Données source

a—d, ratio SI des groupes iDISCO+ féminins (ANOVA à un facteur, F (2, 27) = 22,25, P < 0,0001, n = 8 (CTRL), 11 (RES), 11 (SUS)) (a), temps d'investigation sociale (One-Way ANOVA, F (2, 27) = 20,24, P < 0,0001) (b), évitement social (One-Way ANOVA, F (2, 27) = 7,747, P = 0,0022) (c) et latence au premier combat social (One-Way ANOVA, F (2, 27) = 6,075, P = 0,0066) (d). e—h, rapport SI des groupes iDISCO+ masculins (ANOVA à un facteur, F (2, 25) = 13,85, P < 0,0001, n = 9 (CTRL), 11 (RES), 8 (SUS)) (e), temps d'investigation sociale (One-Way ANOVA, F (2, 25) = 14,07, P < 0,0001) (f), évitement social (One-Way ANOVA, F (2, 25) = 38,76, P < 0,0001) (g) et latence au premier combat social (One-Way ANOVA, F (2, 25) = 7,370, P = 0,0030) (h). i, la vérification de la détection ClearMap cFos montre une annotation (points verts) correspondant au signal cFos (noyaux rouges). j, Vérification de la coloration cFos sur tranche de cerveau chez les mâles montrant que la plupart des cellules cFos + se trouvent dans la partie latérale du septum latéral. k, Statistiques de LS cFos pendant le test RI après CSDS chez les hommes (test t bilatéral non apparié, CTRL, t4 = 1,434, P = 0,2248, n = 3 par groupe, RES, t4 = 1,957, P = 0,1219, n = 3 par groupe, SUS, t9 = 4,429, P = 0,0016, n = 5 (objet), 6 (intrus)). ns, non significatif, * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001, **** P < 0,0001. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem Barre d'échelle, 100 μm.

Données source

a, Rapport de Nt+cFos+/Nt+ (492 neurones sur 520) et Nt+cFos+/cFos+ (492 neurones sur 496) en LS de souris SUS. b, c, Multiplex ISH montre la colocalisation de Nt et Gad2 dans le LS antérieur, moyen et postérieur (b) montre que la plupart des neurones de la neurotensine sont des neurones GABAergiques (c). (n = 3 tranches par souris, n = 3 souris par groupe, barre d'échelle, 100 μm). d,e, Multiplex ISH montre la colocalisation de Nt et Crhr2 dans le LS (d) montre que les neurones Nt et les neurones Crhr2 se chevauchent largement dans les parties antérieure et médiane du LS, mais montrent une très faible colocalisation dans la partie postérieure du LS (e). (n = 3 tranches par souris, n = 3 souris par groupe, barre d'échelle, 100 μm). f, g, Multiplex ISH montre que Nt et Drd3 ne se chevauchent pas dans le LS (n = 3 tranches par souris, n = 3 souris par groupe, barre d'échelle, 50 μm). h, i, Multiplex ISH montre Nt et Oxtr montrant un très faible chevauchement dans le LS (n = 3 tranches par souris, n = 3 souris par groupe, barre d'échelle, 50 μm). j, Images confocales de l'expression de Sst et cFos chez les souris CTRL, RES et SUS après test RI. k, Comparaison des neurones Sst+ cFos+ entre les trois groupes (One-Way ANOVA, F (2, 9) = 4,780, P = 0,0385, n = 4 par groupe, Barre d'échelle, 100 μm). l, Comparaison des neurones Nt− cFos+ entre les souris femelles CTRL, RES et SUS (One-Way ANOVA, F (2, 6) = 0,2755, P = 0,7683, n = 3 par groupe) et les mâles (F (2, 10) = 4,980, P = 0,0316, n = 3–6). ns, non significatif, * P < 0,05. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem

Données source

a, Caractérisation des paramètres d'électrophysiologie ex vivo mesurés dans les neurones NTLS après CSDS chez les souris SUS et RES. De gauche à droite : graphique à barres du potentiel moyen de membrane au repos par neurone (moyenne SUS = −67,49 mV +/− 0,975 mV, n = 55 avec 4–8 neurones/souris ; moyenne RES = −61,62 mV +/− 1,73 mV, n = 19 avec 4 à 7 neurones/souris ; test t de Welch bilatéral, P = 0,0059). Aucune différence de seuil de potentiel d'action (test de Welch bilatéral, P = 0,3037), d'amplitude (test de Welch bilatéral, P = 0,6661), de durée de demi-largeur (test de Welch bilatéral, P = 0,3757) ou de rapidité après l'hyperpolarisation (fAHP) amplitude (test de Welch bilatéral, P = 0,7154). b, Rapport d'interaction sociale de la cohorte de photométrie à fibre après CSDS chez les femmes (ANOVA à un facteur, F (2, 11) = 5,629, P = 0,0207, n = 4 (CTRL), 5 (RES), 5 (SUS)) et mâles (One-Way ANOVA, F (2, 14) = 12,93, P = 0,0007, n = 7 (CTRL), 5 (RES), 5 (SUS (5)). c, activité Ca2+ dans les neurones NTLS pendant la consommation de une tasse de beurre de cacahuète (à gauche). La ligne pointillée en c marque le début de la morsure. Comparaison de la variation de Ca2+ ΔF/F avant et après la morsure (à droite, test t apparié à deux queues, t = 1,577, df = 4, P = 0,1900 , n = 5).d, traces de Ca2+ dans les chambres de conditionnement appariées (rose) et non appariées (bleu). L'encart montre l'aire normalisée sous la courbe (AUC) entre les séances de conditionnement appariées et non appariées (sexes combinés, test t bilatéral apparié , CTRL, t = 0,1977, df = 5, P = 0,8511, RES, t = 1,049, df = 5, P = 0,3423, SUS, t = 5,453, df = 5, P = 0,0028), n = 6 par groupe) . ns, non significatif, * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem

Données source

a, Expression des AAV-DIO-DREADD dans les neurones NTLS. b, l'activation du NTLS chez les souris naïves au stress ne modifie pas le comportement social des femelles (test t bilatéral non apparié, t14 = 1,044, P = 0,3141, n = 8 par groupe) ou des mâles (test t bilatéral non apparié, t14 = 1,434, P =0,3975, n = 8 par groupe). L'activation du NTLS chez les souris naïves au stress ne modifie pas l'activité locomotrice chez les femelles (test t bilatéral non apparié, t14 = 0,3473, P = 0,7335, n = 8 par groupe) ou les mâles (test t bilatéral non apparié, t14 = 1,425, P = 0,1762, n = 8 par groupe). c, l'activation chimiogénétique NTLS chez les souris naïves au stress ne modifie pas la préférence sociale (ANOVA à mesures répétées à deux facteurs, véhicule, F = (1, 16) = 7,198, P = 0,0163, n = 9, CNO, F (1, 18 ) = 6,644, P = 0,0190, n = 10). d, comparaison du score CPP soustrait entre le véhicule et le groupe CNO (test t bilatéral non apparié, t = 0,03518, df = 17, P = 0,9723, n = 10 par groupe). e, Schéma de principe du test CVS et CPP. f, effet CVS sur le sCPP chez les deux sexes (ANOVA à mesures répétées à deux facteurs, femme, CTRL, F (1, 22) = 4,824, P = 0,0389, n = 12, CVS, F (1, 22) = 5,172, P = 0,0331, n = 12 ; homme, CTRL, F (1, 22) = 5,042, P = 0,0351, n = 12 ; CVS, F (1, 22) = 3,900, P = 0,0610, n = 12). g, Schéma de principe de l'injection de virus et de la manipulation optogénétique des neurones NTLS lors du test RTPP. h, l'activation des neurones NTLS ne modifie pas la préférence de lieu en temps réel chez les femmes naïves au stress (test t bilatéral apparié, ChR2, t11 = 0,06179, P = 0,9518, n = 12, EYFP, t15 = 0,01923, P = 0,9849 , n = 16) ou hommes (test t bilatéral apparié, ChR2, t8 = 0,3855, P = 0,7099, n = 9 ; EYFP, t8 = 0,6333, P = 0,5442, n = 9). ns, non significatif. * P < 0,05. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem Barre d'échelle, 100 μm. BioRender a été utilisé pour générer des figures schématiques en c,e,g.

Données source

a, Diagramme schématique du stress de contention chronique et du test RI. b, Comparaison de la latence à la première enquête (test t bilatéral non apparié, t = 3,142, df = 18, P = 0,0056) et du nombre d'épisodes d'enquête (t = 5,259, df = 18, P < 0,0001) avec un nouveau tube de contention, ou retrait du tube (t = 5,229, dl = 18, P < 0,0001), n ​​= 10, entre les animaux témoins (CTRL) et les animaux stressés par contention chronique (CRS). c, Schéma de principe du CRS avec manipulation DREADD pendant le test RI. d, Latence (test t bilatéral apparié, t = 2,065, df = 8, P = 0,0728) et nombre d'épisodes d'investigation (t = 2,619, df = 8, P = 0,0307) avec un nouveau tube de contention, ou retrait du tube (t = 1,988, df = 8, P = 0,0820), n = 9. e, Diagramme schématique du stress de contention chronique avec litière/odeur juvénile (CRSO) et test RI. f, Latence (test t bilatéral non apparié, t = 0,5452, df = 18, P = 0,5923) et nombre d'épisodes d'investigation (t = 0,3971, df = 18, P = 0,6960) avec un nouveau tube de retenue, ou retrait du tube (t = 0,000, df = 18, P > 0,9999), n = 10. g, l'activation de NTLS chez des souris mâles naïves de stress conduit à un comportement de type anxiété plus élevé dans le labyrinthe surélevé plus (t non apparié à deux queues t- test, t14 = 2,824, P = 0,0135, n = 8 par groupe). h, l'activation ou l'inhibition du NTLS chez les souris mâles naïves au stress modulent le comportement d'enfouissement du marbre (test t apparié à deux queues, hM3Dq, t7 = 4,631, P = 0,0024, n = 8 ; hM4Di, t7 = 4,020, P = 0,0051, n = 8). i, l'activation ou l'inhibition du NTLS chez les souris mâles naïves de stress conduit à des niveaux d'anxiété plus élevés ou plus faibles, respectivement, dans le test en champ ouvert (test t bilatéral non apparié, hM3Dq, t14 = 2,189, P = 0,0461, n = 8 par groupe ; hM4Di, t14 = 1,424, P = 0,1762, n = 8 par groupe). j, sans changement locomoteur (test t bilatéral non apparié, hM3Dq, t14 = 1,641, P = 0,1230 ; hM4Di, t14 = 1,566, P = 0,1398). ns, non significatif. * P < 0,05, ** P < 0,01, **** P < 0,0001. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem BioRender a été utilisé pour générer des figures schématiques en a,c,e,i.

Données source

a, Schéma de principe de l'injection du virus H129ΔTK-TT. 48 h après l'injection, il n'y avait pas de neurones tdTomato+ dans les régions en aval des neurones NTLS. b, la vérification du traçage rétrograde AAV-DIO-EGFP/tdTomato montre les connexions monosynaptiques NTLS→NAc, NTLS→AHN, NTLS→PAG. c, Analyse de colocalisation pour chevaucher les neurones de projection NTLS avec le NAc/AHN/PAG. d, traçage de la sous-unité b (CTB) de la toxine du choléra pour les projections NTLS→NAc, NTLS→AHN et NTLS→PAG. Image représentative de LS (panneau du milieu) avec des pointes de flèches jaunes indiquant les neurones projetant à la fois vers NAc et AHN. Les pointes de flèches blanches indiquent les neurones se projetant à la fois sur PAG et AHN. e, nombre de projections montrant la colocalisation des traceurs CTB de trois régions en aval (3 tranches par région cérébrale par souris, n = 3 souris). Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem Barre d'échelle, 100 μm.

a, Schéma du ciblage NTLS avec NpHR et manipulation lors de tests de comportement social. b–e, l'inhibition terminale de l'axone NpHR dans le NAc (b, c) et l'AHN (d, e) a sauvé le temps d'investigation sociale et a partiellement sauvé l'évitement social chez les deux femmes (b, investigation sociale, F (1, 14) = 3,484, P = 0,0831, n = 8 par groupe, évitement social, F (1, 14) = 1,180, P = 0,2956, n = 8 par groupe, d, enquête sociale, F (1, 14) = 4,982, P = 0,0425, n = 8 par groupe ; évitement social, F (1, 14) = 2,266, P = 0,1545, n = 8 par groupe) et hommes (c, enquête sociale, F (1, 14) = 0,2046, P = 0,6580, n = 8 par groupe ; évitement social, F (1, 14) = 1,214, P = 0,2891, n = 8 par groupe, e, enquête sociale, F (1, 14) = 4,597, P = 0,0501, n = 8 par groupe ; évitement social, F (1, 14) = 5,359, P = 0,0363, n = 8 par groupe). fm, Manipulation optogénétique des circuits NTLS → NAc et NTLS → AHN lors du conditionnement social du RPC chez les deux sexes. f, Activation de NTLS→NAc avec récompense sociale bloquée par ChR2 chez les femmes RES (EYFP, F (1, 12) = 2,362, P = 0,1502, n = 7, ChR2, F (1, 14) = 0,5543, P = 0,4689, n = 8) g, l'inhibition de NTLS → NAc avec NpHR a sauvé les déficits de récompense sociale chez les femmes SUS (EYFP, F (1, 14) = 0,5105, P = 0,4867, NpHR, F (1, 14) = 4,183, P = 0,0601 , n = 8 par groupe). h, Activation de NTLS → AHN avec récompense sociale bloquée par ChR2 chez les femmes RES (EYFP, F (1, 12) = 4,289, P = 0,0606, n = 7, ChR2, F (1, 14) = 0,0001296, P = 0,9911, n = 8). i, l'inhibition de NTLS → AHN avec NpHR a sauvé les déficits de récompense sociale chez les femmes SUS (EYFP, F (1, 14) = 0,1068, P = 0,7487, NpHR, F (1, 14) = 4,575, P = 0,0505, n = 8 par groupe). j, Activation de NTLS→NAc avec récompense sociale bloquée par ChR2 chez les hommes RES (EYFP, F (1, 12) = 5,703, P = 0,0343, n = 7, ChR2, F (1, 14) = 0,2484, P = 0,6259, n = 8). k, l'inhibition de NTLS → NAc avec NpHR a sauvé les déficits de récompense sociale chez les hommes SUS (EYFP, F (1, 14) = 4,053, P = 0,0637, NpHR, F (1, 14) = 4,140, ​​P = 0,0613, n = 8 par groupe). l, Activation de NTLS → AHN avec récompense sociale bloquée par ChR2 chez les hommes RES (EYFP, F (1, 12) = 6,329, P = 0,0271, n = 7, ChR2, F (1, 14) = 0,1567, P = 0,6981, n = 8). m, l'inhibition de NTLS → AHN avec NpHR a sauvé les déficits de récompense sociale chez les hommes SUS (EYFP, F (1, 12) = 0,6881, P = 0,4230, NpHR, F (1, 14) = 10,02, P = 0,0069, n = 8 par groupe). Une ANOVA à mesures répétées bidirectionnelles a été effectuée pour toute comparaison dans cette figure : ns, non significatif. * P < 0,05, ** P < 0,01. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem BioRender a été utilisé pour générer des figures schématiques en a.

Données source

a, b, cartographie de circuit assistée par ChR2 des voies NTLS → NAc et NTLS → AHN montrant des connexions monosynaptiques (avec TTX), inhibitrices (internes à base de Cs, bloquées à 0 mV) et dépendantes de GABAa (SR-95531, Gabazine) dans 5/8 neurones NAc/NDB et 4/10 neurones AHN. c, Courant entrant évoqué par la lumière dans un neurone ChR2-EYFP + Cre + en mode voltage-clamp (clampé à -70 mV) lors d'un éclairage de 1 s avec une lumière bleue de 470 nm (à gauche) et des pointes induites par des impulsions de 15 Hz (à droite). d, Diagramme schématique de l'infection et de la manipulation des neurones non-NTLS lors des tests de comportement social. e, f, Multiplex ISH pour Nt et CreOff-ChR2-EYFP. c, Chevauchement des neurones Nt+ EYFP+ parmi les neurones EYFP+ (2-3 tranches par souris, n = 5 souris). g, Courant entrant évoqué par la lumière dans les neurones ChR2-EYFP + non-Cre en mode voltage-clamp (clampé à -70 mV) lors d'un éclairage de 1 s avec une lumière bleue (470 nm). h, Effet de la stimulation ChR2 des neurones non-Nt sur l'investigation sociale et l'évitement social pendant le test RI (analyse à effets mixtes ANOVA bidirectionnelle, gauche, F (1, 13) = 0,2137, P = 0,6516, droite, F (1 , 13) = 0,5672, P = 0,4648, n = ChR2 (10), EYFP (5)). ns, non significatif. Toutes les données sont exprimées en moyenne ± sem Barre d'échelle, 50 μm.

Données source

Régions montrant une différence significative entre les hommes SUS et CTRL (analyse iDISCO+).

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Réimpressions et autorisations

Li, L., Durand-de Cuttoli, R., Aubry, AV et al. Le traumatisme social engage les circuits du septum latéral pour obstruer la récompense sociale. Nature 613, 696–703 (2023). https://doi.org/10.1038/s41586-022-05484-5

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Reçu : 19 juillet 2021

Accepté : 25 octobre 2022

Publié: 30 novembre 2022

Date d'émission : 26 janvier 2023

DOI : https://doi.org/10.1038/s41586-022-05484-5

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